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士鋒生物原位雜交與熒光原位雜交
點擊次數：1099 發布時間：2014-6-4
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)
是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分泌學、免疫學等領域及治療評估和預后判斷等研究中。
菌落原位分子雜交：是指將轉化或感染后的菌落印影在濾膜上，用堿裂解，中和后洗凈烘干，再用目的基因的放射性DNA或mRNA作探針(Probe)進行雜交放射自顯影，凡出現黑點的菌落即應中選。
二、熒光原位雜交(Fluorescence in situ Hybridization)
是原位雜交技術大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末被發明，現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復性；通過工業區光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中zui常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平的分析。在該領域中產品頗具名氣的公司之一為美國Vysis公司，它是一家專業生產FISH產品的公司，其產品涉及到熒光標記探針，雜交，檢測用試劑，雜交用儀器，觀察分析用儀器用及軟件等，幾乎涵蓋FISH技術所需的所有試劑和設備。
熒光標記控針不對環境構成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。Vysis公司的熒光標記探針均為直接法標記，可省去信號放大系統，減少試劑投入且保障更大程度的特異性，同時也有信號清晰，背景低及方法簡單易于操作等優點。