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士鋒生物薄層色譜法介紹
點擊次數:1297 發布時間:2014-6-24
薄層色譜具有設備簡單、速度快、分離效果好、靈敏度高以及能使用腐蝕性顯色劑等優點,是一種微量的分離分析方法。它可以與光譜或質譜結合起來,是一種很有發展前途的分析技術。
薄層色譜是把吸附劑或支持物(如氧化鋁、硅膠和纖維素粉等)均勻地鋪在一塊玻璃板上形成薄層,將分離樣品滴加在薄層的一端,當流動相沿著含有固定相的支持物上移動時,被分離組分就在固定相與流動相之間進行分配或吸附,經過反復無數次的分配平衡或吸附平衡,zui后按照各個組分的差異而被分離。
三、基本操作
薄層色譜中,鋪薄層的板可用玻璃板,也可用塑料板。鋪在板上的吸附劑(或支持物)可分為加粘合劑的硬板和不加粘合劑的軟板。薄層色譜技術包括制板、點樣、展開、顯色等步驟。現分述如下:
1. 薄層板的制備
薄層板制備的好壞直接影響色譜的結果,薄層應盡量鋪得均勻,厚度在0.25~0.5mm之間。
硅膠和氧化鋁的粘性差,使用前必須加粘合劑。市售的硅膠G 和氧化鋁G 均已含有粘合劑半水石膏,可直接加入水調勻后鋪層。
薄層色譜法
(a)1-玻璃板; 2-厚度墊板; 3-吸附劑; 4-有機玻璃尺
(b)1-玻璃板; 2-玻璃條; 3-有機玻璃尺; 4-吸附劑
(c)1-玻璃板; 2-玻璃棒; 3-控制厚度的金屬絲; 4-吸附劑
圖2.55 薄層板涂布法
薄層的涂布有傾斜法和平鋪法等多種方法。傾斜法是將調勻的糊狀物倒在玻璃板上,用手搖晃,使其表面均勻光滑,然后靜置固化。平鋪法是將調勻的糊狀物,倒在玻璃板的一端,用一根均勻的玻璃棒(直徑0.6~0.8cm),兩端各繞一根不銹鋼細絲(0.2~0.3mm)或鎳鉻絲,將糊狀物均勻平鋪,即可涂布成均勻的一層。涂布的時間、推移的速度力求均勻一致,一次推移完畢,不宜來回操作,如(圖2.55c)。按上述方法涂好板后,靜置讓其固化晾干。
經室溫干燥的薄層還要活化,所謂“活化”就是在高溫除去水分,硅膠薄層和纖維薄層要在110℃下干燥1 小時,氧化鋁薄層在80℃烘烤半小時,聚酰胺薄層要在110℃下干燥5min?;罨蟮谋討旁诟稍锲鲀缺4?。
2. 點樣
用毛細管或微量注射器取樣品溶液,在上述制好的薄層板一端約1.5cm 處,,垂直地輕輕地接觸到薄層上的吸附劑,樣品溶液就可靠到薄層上。應分次點下,不可一次點得太多,不然樣品點直徑太大,樣點直徑一般以2~4mm 為宜。在定性和定量分析時,同一薄層上的樣點直徑應一致。