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DNS（二硝基水楊酸）比色法還原糖含量測定實驗
點擊次數(shù)：1849 發(fā)布時間：2014-7-11
還原糖的測定實驗是生化技術(shù)中基礎(chǔ)實驗，是生化課程中必須掌握的實驗操作技術(shù)，不明白還原糖的測定原理、測定方法？本文羅列了DNS還原糖含量測定實驗原理、步驟、DNS試劑的制備、葡萄糖標準曲線的繪制、樣品的測定。
一、實驗?zāi)康摹?/em>
DNS(二硝基水楊酸)比色法還原糖含量測定實驗實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)和了解還原糖和總糖測定的基本原理、比色法測定還原糖的操作步驟和分光光度計的使用方法。
二、實驗原理
還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。
還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類。單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，例如乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用各種糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來。對非還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成還原性單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(常以葡萄糖含量計)。
還原糖在堿性條件下加熱可被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，而氧化劑3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應(yīng)乘以系數(shù)0.9。
三、DNS試劑的制備
將6.3克DNS和262ml 2mol/L氫氧化鈉，加到500ml含有182克酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水楊酸試劑，貯于棕色瓶中備用。
四、葡萄糖標準曲線的繪制
分別取葡萄糖標準液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25 ml試管中，分別準確加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min，流水冷卻，用水補足到15ml刻度。在540nm波長下測定吸光度。
五、樣品的測定
樣品液適當稀釋，使糖濃度為0.1-1.0mg/ml，取稀釋后的糖液1.0ml于15ml刻度試管中，加DNS試劑2.0ml，沸水煮沸2min，冷卻后用水補足到15ml刻度，在540nm波長下測定吸光度。從標準曲線查出葡萄糖mg/ml數(shù)。求出樣品中糖含量。
為生化實驗報告發(fā)愁的同學(xué)，不妨看看這篇文章，希望對大家有用。其實zui主要的是要熟知DNS還原糖含量測定原理，至于實驗試劑配制、操作步驟，這些都大同小異，機械式的操作。只有掌握了原理才能明白為什么要這樣做，操作中必須注意的事項。