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　　氯霉素類抗生素可作用于細菌核糖核蛋白體的50S亞基，而阻撓蛋白質的合成，屬抑菌性廣譜抗生素。
　　細菌細胞的70S核糖體是合成蛋白質的主要細胞成分，它包括50S和30S兩個亞基。氯霉素通過可逆地與  50S亞基結合,阻斷轉肽酰酶的作用，干擾帶有氨基酸的胺基酰-tRNA終端與50S亞基結合，從而使新肽鏈的形成受阻，抑制蛋白質合成。由于氯霉素還可與人體線粒體的70S結合,因而也可抑制人體線粒體的蛋白合成，對人體產生毒性。因為氯霉素對70S核糖體的結合是可逆的，故被認為是抑菌性抗生素，但在高藥物濃度時對某些細菌亦可產生殺菌作用，對流感桿菌甚至在較低濃度時即可產生殺菌作用。
　　氯霉素對革蘭陽性、陰性細菌均有抑制作用，且對后者的作用較強。其中對傷寒桿菌、流感桿菌、副流感桿菌和百日咳桿菌的作用比其他抗生素強，對立克次體感染如斑疹傷寒也有效，但對革蘭陽性球菌的作用不及青霉素和四環素?？咕饔脵C制是與核蛋白體50S亞基結合，抑制肽酰基轉移酶，從而抑制蛋白質合成。
　　各種細菌都能對氯霉素發生耐藥性，其中以大腸桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌等較為多見，傷寒桿菌及葡萄球菌較少見。細菌對氯霉素產生耐藥性比較慢，可能是通過基因的逐步突變而產生的，但可自動消失。細菌也可以通過R因子的轉移而獲得耐藥性，獲得R因子的細菌能產生氯霉素乙酰轉移酶（acetyltransferase）使氯霉素滅活。

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