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技術文章

日本同仁CK04 cck-8試劑盒的簡介

點擊次數:1059 發布時間:2023-3-14

日本同仁CK04 cck-8試劑盒

日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產品簡介:

產品品牌:同仁

產品名稱:cck-8試劑盒

英文名稱:Cell Counting Kit-8

產品貨號:CK04

產品規格:500t

日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產品說明:

Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明:
一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時)

1

、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。

2

、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。

3

、接種后培養至細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間。)
二、細胞活性檢測

1

、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在37,5% CO2的條件下)。

2

、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。

3

、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

4

、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5

、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。
三、細胞增值-毒性檢測

1

、在96孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37 ℃,5% CO2的條件下)。

2

、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6122448小時)。

3

、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。

4

、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

5

、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

6

、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。



活力計算:.
細胞活力(%)=[A(加藥)A(空白)][ A(0加藥)A(空白)]×100

A

(加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A

(空白):具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A

0 加藥):具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項:
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。
②白細胞可能需要培養較長時間。
③當使用標準96 孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1 ,000/ (100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 / ( 100 μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm檢測靈敏度最高。
⑤培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。


CCK-8

法與其它檢測方法之間的比較:
細胞計數方法 MTT XTT WST-1 CCK-8
形成的formazan 的水溶性 差 好 好 好
產品性狀 粉末 2 瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 現配現用 無需預制 無需預制
檢測靈敏度 高 很高 很高 高
檢測時間 較長 較短 較短 最短
檢測波長 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
細胞毒性 高,細胞形態wanquan消失 很低,細胞形態不變 很低,細胞形態不變 很低,細胞形態不變
試劑穩定性 一般 較差 一般 很好
大批量樣品檢測 可以 非常適合 非常適合 非常適合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷







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