Qiagen凱杰試劑盒205410/205411/205413
用于快速的cDNA合成和高度可重復性的兩步法RT-PCR
?gDNA Removal Mix可消除gDNA帶來的誤差
?內(nèi)質(zhì)控可指示cDNA合成的質(zhì)量
?高親和性逆轉(zhuǎn)錄酶可實現(xiàn)寬線性范圍的cDNA合成

Qiagen凱杰試劑盒205410/205411/205413

用于快速的cDNA合成和高度可重復性的兩步法RT-PCR

• gDNA Removal Mix可消除gDNA帶來的誤差

• 內(nèi)質(zhì)控可指示cDNA合成的質(zhì)量

• 高親和性逆轉(zhuǎn)錄酶可實現(xiàn)寬線性范圍的cDNA合成

*的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因組DNA去除方案和內(nèi)質(zhì)控的一種快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染，同時內(nèi)質(zhì)控RNA可以監(jiān)測逆轉(zhuǎn)錄和擴增反應是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆轉(zhuǎn)錄反應所需的一切。合成的cDNA適用于進行real-time PCR, 可以對任何mRNA區(qū)域的靶向序列進行可靠定量。

Performance

*的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。去除基因組DNA污染對于獲得精確基因表達結(jié)果非常關(guān)鍵，并且在不能設計出RNA特異性的引物時，例如當分析單外顯子基因時，也需要去除基因組DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以節(jié)省時間和成本，因為不需要在反應中或反應后單獨進行DNase消化。

全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應儀器或相應試劑是否正常，實驗構(gòu)建的體系是否存在錯誤，以及反應體系中是否存在抑制劑。預期的C_q (C_T)范圍可以用來確認逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的成功與否，以及實驗結(jié)果的可重復性。

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA親和性確保您可從任何RNA模板獲得高產(chǎn)率cDNA。即便是難擴增模板，如高GC含量或含有復雜二級結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進行逆轉(zhuǎn)錄反應。Reverse Transcription Mix包含一種特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機引物混合物，可以從包括5’區(qū)域在內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄本的任何位置進行cDNA合成。無論擴增靶標位于轉(zhuǎn)錄本的哪個位置，該試劑盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高產(chǎn)量cDNA。同時對于低表達豐度的基因, 該試劑盒還可提供更高靈敏度的檢測能力。

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在較寬的起始量范圍內(nèi)提供精確的結(jié)果，在標準的實驗方案中起始RNA量可zui高達5 µg，在特殊要求的實驗條件下該用量可以加倍。

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA親和性，可以在極寬的模板量范圍內(nèi)（10 pg– 5 μg）合成cDNA（見圖：5 µg–10 pg起始 RNA的精確定量）。無論擴增靶標位于轉(zhuǎn)錄本的哪個位置，該試劑盒可提供用于real-time PCR分析的高產(chǎn)量cDNA。即使難擴增模板，比如高GC含量或含有復雜二級結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進行逆轉(zhuǎn)錄反應。QuantiNova RT Buffer經(jīng)過優(yōu)化，可兼容real-time PCR緩沖液。

為獲得精確的real-time RT-PCR基因表達檢測結(jié)果，非常重要的一點是保證只有cDNA被擴增和檢測到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因組DNA干擾(見圖：有效去除gDNA污染保證準確定量轉(zhuǎn)錄本）。使用gDNA Removal Mix節(jié)省了時間和成本，因為不需要在反應中或反應后單獨進行DNase消化。同時，也無需設計RNA特異性引物或探針。

檢測cDNA合成的差異度可以顯示實驗結(jié)果的可重復性。全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應儀器或相應試劑是否正常，實驗構(gòu)建的體系是否存在錯誤，以及反應體系中是否存在抑制劑。因為內(nèi)質(zhì)控和真實轉(zhuǎn)錄本的性質(zhì)相似，所以它可以在接下來的qPCR實驗中用來確認逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的成功與否（見圖：內(nèi)質(zhì)控可靠檢測是否存在抑制劑）。

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit進行基因組DNA去除和cDNA合成僅需20分鐘。該試劑盒包含進行快速cDNA合成的所需的一切成分。

純化后的RNA和gDNA Removal Mix簡單孵育即可除去基因組DNA污染。和其它方法不同的是，RNA樣本接下來可直接與Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的預混液混合，進行逆轉(zhuǎn)錄反應。使用QuantiNova Reverse Transcriptase，逆轉(zhuǎn)錄反應可以在低溫下進行，包括對于復雜的二級結(jié)構(gòu)模板。反應在42°C的溫度條件下進行保證了RNA的完整性，并隨后在85°C進行酶滅活以終止反應。不需要進行額外的RNA變性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可從任何起始材料（包括激光微切割樣本或組織活檢樣本）獲得高效及高靈敏度real-time RT-PCR結(jié)果。