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一、原理
喹諾酮類ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中喹諾酮類的殘留量。
二、適用范圍
喹諾酮類ELISA檢測試劑盒定量檢測組織、生鮮奶樣本中喹諾酮類殘留。
三、試劑盒特點及技術指標
* 檢 測 時 間 ： 30min
試劑盒靈敏度： 0.1ppb(µg/kg)
* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜4ppb；
* 樣品處理方法簡潔，符合率大于95%；
試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：
試劑盒交叉反應率：
藥物 | 交叉反應率 |
喹諾酮類(QNS) | 100 |
恩諾沙星(ENR) | 100 |
環丙沙星(CIF) | 86 |
依諾沙星（EN |
|
四、所需材料
儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、均質器、振蕩器、離心機、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL
多道 50µL～300µL
試劑：去離子水、乙腈、正己烷
五、 試劑盒組成
序號 | 組成部分 | 96T裝量 |
1 | 喹諾酮類酶標板 | 12×8孔 |
2 | 喹諾酮類標準品*5 | 0.5-1mL |
3 | 喹諾酮類酶標物 | 7 mL |
4 | 喹諾酮類抗體 | 7 mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 終 止 液 | 7 mL |
8 | 20×濃縮洗滌液 | 40 mL |
9 | 2×喹諾酮類樣品稀釋液 | 40mL |
樣本 | 檢測下限 | 回收率 |
組織 | 10ppb | 70%-120% |
蜂蜜 | 10ppb | 70%-120% |
*注：A、B、C、D、E共5個標準品濃度為：0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb，A、B標準品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。
六、溶液配制
配液1: 洗滌工作液
用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋，用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環境可保存一個月，用前一天取出回溫。
配液2: 1×喹諾酮類樣品稀釋液
用去離子水將2×喹諾酮類樣品稀釋液按1: 1的體積比進行稀釋，用于樣本前處理的稀釋，
七、樣本前處理
樣本處理前須知：
① 處理完的樣品應及時進行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。② 樣本數目超過8個時推薦使用排槍加樣。
組織（稀釋倍數：100)
① 稱取樣品1.0g ± 0.05g至50mL離心管中，加入2mL 0.01M 氫氧化鈉，震蕩提取1min，加入2mL乙腈 震蕩提取1min；
② 4000rpm離心5min.；
③ 小心取出上層溶液50μL至另一離心管，加入950μL 0.01M PBS，震蕩混勻30s，取50μL用于分析。
生鮮奶（稀釋倍數：100)
10μL生鮮奶至另一離心管，加入990μL 去離子水，震蕩混勻30s，取50μL用于分析。
八、 酶標免疫測定程序
加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內液體，重復洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜
蓋板后置37℃避光環境中反應10min。
九、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以喹諾酮類標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中喹諾酮類實際濃度。（詳見試劑盒專業分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）
十、 注意事項
① 根據體積大小不同取出回溫的時間從1小時~3小時，體積15毫升以上的先從冷藏環境取出回溫，
② 洗板拍干后應立即進行下一步操作。
③ 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
④不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。
⑤ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色 時間為15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min，反之則減短反應時間。
⑦ 底物液B液長期使用變為淺藍色時，請放心使用，不影響檢測結果。
⑧ 未提及樣本請致電本公司技術服務部。
十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質 期： 12個月
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