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分枝桿菌的細胞壁內含有大量脂質包圍在肽聚糖的外面, 所以分枝桿菌一般不易著色，傳統的染色方法要經過加熱和延長染色時間來促使其著色。分枝桿菌中的分枝菌酸與染料一旦結合后，就很難被酸性脫色液脫色，故名抗酸染色，其中代表性是結核桿菌Ziehl－Neelsen染色法，該法是WHO推薦熱染的方法。
Leagene(金胺O-羅丹明熒光法)屬于熒光染色液，無需加熱，相對較抗酸熱染液安全，其染色原理是在室溫條件下Auramine O-羅丹明染色以及復染后，用含有紫外光源的熒光顯微鏡檢查，抗酸桿菌呈亮黃色，而其他細菌及背景中的物質呈暗黃色，這種方法可用低倍鏡檢，因此能更快速找出抗酸性菌。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
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