軟骨組織由軟骨細胞和軟骨基質組成，軟骨組織及其周圍的軟骨膜構成軟骨，軟骨根據基質內所含纖維素成分不同分為透明軟骨、彈性軟骨、纖維軟骨，軟骨染色方法有很多種，例如甲苯胺藍法、阿利新藍法、番紅O法等。

Leagene改良番紅O-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結合呈現紅色，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結合而呈綠色或藍色，與呈現紅色的軟骨對比鮮明，從而將軟骨組織與骨組織區分開。番紅O是一種結合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團（或硫酸角質素）結合，番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關系，間接反映基質中蛋白多糖的含量和分布；當軟骨受到損傷時軟骨中的糖蛋白會釋放出來，使基質成分分布不均勻，從而導致番紅O淡染或不著色，通過圖像分析軟件可對番紅O染色的軟骨基質進行定量分析，固綠與膠原纖維結合，不易褪色，番紅O-固綠染色的分化很關鍵，分化過度易導致切片不著色，分化不足易導致切片著色過深。該試劑僅適用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。