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TEA-Tricine-SDS電泳緩沖液(20×,pH8.3)
TCEP即TCEP-HCl,全稱Tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride,中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽,分子式為C9H15O6P?HCl,分子量為286.65,CAS號51805-45-9。
Leagene TCEP溶液(0.5M,pH6.8)為 TCEP-HCl的水溶液配制而成,用NaOH調節pH值至6.8,常作為DTT的替代物用于蛋白上樣緩沖液和其它還原試劑的配制。在SDS-PAGE電泳中,一般終濃度在25mM左右的TCEP即可足夠還原蛋白樣品。TCEP有如下優點:
無味----與DTT和β-巰基乙醇不同,TCEP無異味,助于創造健康的實驗環境;
高效----5到50mM在數分鐘內可還原大多數多肽或蛋白的二硫鍵(與DTT等效);
特異----選擇性的還原甚至水溶液中的烷基化二硫鍵;
快速----在室溫和pH5.0的條件下,五分鐘內即可還原蛋白的二硫鍵;
穩定----耐空氣氧化,無揮發性,與蛋白的其它功能基團不反應;
通用----可在廣泛pH范圍、鹽、去垢劑、溫度條件下還原多肽和蛋白;
兼容----不含巰基,在多數應用中不必去除還原試劑。
TCEP對還原二硫鍵選擇性,除半外,幾乎不會與其它氨基酸有反應,并且能在更寬的pH值范圍包括酸性條件下使用,從而有效減少酰胺鍵的水解。TCEP的反應活性溫和、易溶、毒性小,且更容易操作,在酸性、堿性溶液中的穩定性都很好。
TCEP是一種高效、無異味、不含硫醇基的水溶性還原劑,可選擇性還原多肽或蛋白質中的二硫鍵。TCEP具有更佳的穩定性、更廣的兼容性、更強的還原性、更好的選擇性,而且由于不含巰基,因此在多數應用中不必去除,從而廣泛應用于生物化學和分子生物學中,特別是在蛋白質化學、蛋白質組學中,是的DTT的良好替代物。
TCEP使用范圍廣泛,無論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原,還是一些特殊的實驗如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實驗,也特別適用于標記蛋白純化、馬來酰亞胺偶聯半殘基反應,它能夠預防半殘基形成二硫鍵,但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來酰亞胺反應。
該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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