全自動垂直振蕩提取-超高效液相色譜-串聯質譜法測定魚肉中地西泮殘留量
單長海 ,馬作江 ,楊周 ,黃山 ,李翔 ,孫輝
（國家富硒產品質量檢驗檢測中心，湖北恩施 445000）
DOI；10.3969/j.issn.1008-6145.2024.07.011
地西泮又名安定，屬于苯二氮卓類鎮靜劑，具有鎮靜、抗驚厥等作用[1]。近年來，一些不法商販在魚類的捕撈和運輸過程中非法使用地西泮，導致其在水產品中殘留[2]。魚肉是日常生活重要的食物，人體長期攝入含有地西泮殘留的魚肉后，會產生一系列副作用，如易怒、嗜睡、幻聽、頭痛、乏力等，甚至可能導致藥物依賴和耐藥性，嚴重威脅人體健康[3-4]。許多國家已將地西泮列為動物養殖和運輸過程中禁止使用的藥物，GB 31650—2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留量》規定魚肉中不檢出地西泮。目前，從魚肉中地西泮的監管檢驗情況來看，檢出率較高，是市場監管部門重點監管對象。
國家富硒產品質量檢驗檢測中心發表的文章中，作者采用乙腈作為提取溶劑，V20垂直振蕩器提取，MCX固相萃取小柱凈化，并通過液相色譜-串聯質譜法檢測，方法提取效率高，凈化效果好，降低了樣品基質干擾，提高了方法準確性，可用于魚肉中地西泮殘留量的大批量檢測。
實驗相關
1、睿科集團 產品支撐
2、實驗步驟
2.1樣品處理
稱取魚肉試樣2 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，在垂直振蕩儀中以1 000 r/min振蕩5 min。然后，以10000 r/min離心5 min，將上清液轉入另一50 mL離心管中。對殘渣再加入15 mL乙腈，重復提取并離心一次，合并兩次上清液，并用氮氣吹干。加入3 mL 5%(體積分數)乙酸水溶液，渦旋1 min。用3 mL甲醇和3 mL水依次活化MCX萃取柱，取備用液過柱，用5 mL 5%(體積分數，下同)乙酸水溶液洗滌，抽干，再用5 mL 10%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，并在40 ℃下用氮氣吹干。用1.0 mL 20%乙腈水溶液溶解殘渣，通過0.22 μm濾膜過濾，待上機測試。
2.2實驗方法
以目標化合物質量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。取經樣品處理的待測溶液進行測定，將目標物色譜峰面積代入標準曲線方程中，得到樣品提取液質量濃度，代入樣品質量及提取液體積進行換算得到樣品中目標物的質量濃度。
提取方式的選擇
V20垂直振蕩器，可以根據需要設置振蕩頻率，無需人工操作。比較提取5min振動頻率分別為500、800、1000、1200、1500 次/min的提取效率，每個頻率稱取3個平行質控樣，按照2.1樣品處理的方法進行樣品提取回收率試驗。圖1為不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率，從圖1中可以看出，當振動頻率高于1000次/min時，提取效率無明顯差別，因此提取頻率采用1000次/min。
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圖1 不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率
比較超聲提取法、渦旋提取法和全自動垂直振蕩儀提取法對質控樣中地西泮提取的提取回收率，提取時間分別為5、10、15、20、30 min。按照2.1樣品處理的方法進行樣品提取回收率試驗。圖2為三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率，從圖2可以看出，超聲法提取效率較低，可能是塑料離心管阻礙了超聲波的傳遞，渦旋法提取效率次之，全自動垂直振蕩提取法效率非常高。綜合以上，選擇全自動垂直振蕩提取法，以實現批量操作，省時省力，操作簡單。
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圖2 三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率
完整版論文收錄在《化學分析計量》
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