CAR-T療法就是嵌合抗原受體T細胞免疫療法,英文全稱ChimericAntigen Receptor T-Cell Immunotherapy。其中T淋巴細(Tlymphocyte)簡稱T細胞,是由來源于骨髓的淋巴干細胞,在胸腺中分化、發育成熟后,通過淋巴和血液循環而分布到全身的免疫器官和組織中發揮免疫功能。而CAR(腫瘤嵌合抗原受體),將T細胞與CAR結合,即CAR-T細胞,利用其“定位導航裝置”CAR,專門識別體內腫瘤細胞,高效地殺滅腫瘤細胞,從而達到治療惡性腫瘤的目的。
正在進行“戰斗”的CAR-T細胞
由于CAR-T能夠定向治療疾病,又被稱作給患者“活的藥”。目前CAR-T治療只是用于少量臨床實驗和晚期血癌的患者治療。由于其它的治療方案都已經沒有辦法時,CAR-T的顯著效果這都引起研發人員和公眾的關注,這些患者中包括成人和孩子。2017年,CAR-T治療被美國FDA批準應用于孩子急性淋巴細胞白血病和成人晚期細胞癌。由于T細胞采取患者本身體內,不會產生免疫系統的抗性,因此幫忙患者進行治療疾病。
CAR-T治療流程
標準的CAR-T治療流程主要分為以下七個步驟進行(整個療程持續5周左右):
1.評估病人是否符合CAR-T治療的適應癥
2.分離T細胞:通過外周血血細胞分離機從腫瘤病人血液中分離出單個核細胞,進一步純化T細胞。
3.改造T細胞:用基因工程技術,把一個含有能識別腫瘤細胞且激活T細胞的嵌合抗原受體的病毒載體轉入T細胞,即把T細胞改造成CAR-T細胞。
4.擴增CAR-T細胞:在體外培養以大量擴增CAR-T細胞。一般一個病人需要幾千萬,乃至幾億個CAR-T細胞,體重越大,需要細胞越多。
5.CAR-T細胞回輸入人體:把擴增好的CAR-T細胞通過靜脈回輸到病人體內,開始進行腫瘤細胞免疫治療。
6.監控反應:嚴密監護病人身體反應,尤其是細胞輸入體內后一至兩周內可能發生劇烈不良反應。
7.評估治療效果:多在回輸CAR-T細胞后第15天和第30天評估對原發病的治療效果。
目前研究學者正在為其他類型的CAR-T治療,即通用型CAR-T細胞。在采集過程中,T細胞不是來自患者,而是取自已經治愈的患者體內。這樣就不用針對每個病例,而單獨進行培養各自的CAR-T細胞。通用型CAR-T療法則可以對異體T細胞進行提前制備,隨時提供給患者。此外,它也不受患者自身T細胞質量的影響。但它還是一個新興領域,人們對CAR-T細胞治療的科學認識尚有許多需要解決的問題。
相關操作
1、血液中的白細胞有五種,按照體積從小到大是:淋巴細胞,嗜堿性粒細胞,嗜中性粒細胞,嗜酸性粒細胞和單核細胞。然后采用連續或者半連續的密度梯度離心的方法,再經過磁珠法進行細胞富集。

程序控制離心機
2、通過分子生物學操作,讓質粒攜帶CAR基因,大量擴增質粒的目的是擴增CAR基因,用于轉導使用。其中質粒是細菌、放線菌等生物中染色體(或擬核)以外的DNA分子,存在于細胞質中(但酵母除外,酵母的2 μm質粒存在于細胞核中),具有自主復制能力,使其在子代細胞中也能保持恒定的拷貝數,并表達所攜帶的遺傳信息,是閉合環狀的雙鏈DNA分子。

恒溫振蕩培養箱
3.用貼壁細胞和懸浮細胞培養,通過病毒轉染細胞的方法生產目的病毒。

滾瓶培養用于貼壁細胞培養

培養箱用于懸浮細胞培養
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