樣本收集:依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,采集適量人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本。血清樣本需在血液自然凝固后離心獲取;血漿樣本則需使用抗凝劑處理血液后離心得到;細(xì)胞培養(yǎng)上清按細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范收集并離心去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。收集后的樣本應(yīng)妥善保存,避免反復(fù)凍融。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫平衡 30 分鐘,使試劑盒內(nèi)各試劑溫度與室溫一致,減少溫度差異對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同時,準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的移液器、吸頭、酶標(biāo)儀等器材,并確保其性能良好。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本及空白對照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板相應(yīng)孔中,輕輕振蕩混勻,確保樣本與包被抗體充分接觸,然后在設(shè)定溫度下孵育一定時間。
洗板:孵育結(jié)束后,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,以去除未結(jié)合的物質(zhì),減少非特異性信號干擾。每次洗滌后需拍干微孔板底部殘留液體。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗體,振蕩混勻后再次孵育。
顯色與終止:加入底物顯色液,避光孵育,待顏色變化至合適程度時,加入終止液終止反應(yīng),使反應(yīng)停止在最佳檢測狀態(tài)。
結(jié)果測定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中雙花扁豆凝集素的含量。
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的雙花扁豆凝集素,滿足對微量樣本或低表達(dá)水平的檢測需求。
良好的特異性:試劑盒中的抗體對雙花扁豆凝集素具有高度特異性,與其他類似物質(zhì)交叉反應(yīng)極小,保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
重復(fù)性佳:同一批樣本多次檢測結(jié)果穩(wěn)定,變異系數(shù)小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠,為科研及臨床診斷提供可重復(fù)性數(shù)據(jù)支持。