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滅菌方法概述

熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min 或 180℃45~60min。

蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用 68kPa(115℃)高壓滅菌 10min; 布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。

濾過除菌：適于含有不耐熱成分的培養(yǎng)基和試劑的除菌，用孔徑為 0.22μm 微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等，用此濾膜過濾兩次，可使支原體達(dá)到某種程度的去除，但不能除去病毒。

紫外線：紫外線的波長為 200~300nm，zui強(qiáng)是在 254 nm，6~15 平方米zui少一只紫外燈，高度要在 2.5m 以下，濕度 45%~60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌zui差，實驗前應(yīng)不低于 30 分鐘的照射時間。

熏蒸消毒：當(dāng)遇有細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)多次污染，或?qū)嶒炇覂蓚€月一次的常規(guī)消毒，均可用高錳酸鉀 5~7.5g，加甲醛(40%)10~15ml，混合放入一開放容器內(nèi)，立即可見白色甲醛煙霧，消毒房間需封閉24小時，致少 4 小時以上。

煮沸消毒：緊急情況時使用，金屬器械和膠蹇在水中煮 20~30 分鐘，趁熱傾去水分即可使用。

化學(xué)消毒：化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制進(jìn)行消毒滅菌的方法。實驗室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒殺菌。常用的有：2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、1%升gong、3~5%甲醛溶液、75%酒精。

沸消毒法：

注射器和解剖器械等均可采用此法。先將注射器等用紗布包好，然后放進(jìn)煮沸消毒器內(nèi)加水煮沸。對于細(xì)菌的營養(yǎng)體煮沸約

15～30min，對于芽孢則需煮沸約 1～2h。

高壓蒸汽滅菌法：

高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學(xué)實驗中zui常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計的。當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到 1.05kg/cm2 時，水蒸氣的溫度升高到 121℃，經(jīng) 15～30min，可全部殺死鍋內(nèi)物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服等都可應(yīng)用此法滅菌。

干熱滅菌法

通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把

待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至 160～170℃ 維持 1～2h。

干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌。

滅菌前的準(zhǔn)備：

玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi);三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結(jié)扎緊，以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過火焰燒去，滅菌時將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行滅菌，也可用紙條斜著從吸管包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。

干燥箱滅菌

將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi)，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至 160～170℃并恒溫 1～2h，注意勿使溫度過高，超過 170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為 120℃持續(xù) 30 分鐘即可。溫度降至 60～70℃時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。

用此法滅菌時，絕不能用油、蠟紙包扎物品。

火焰滅菌

直接用火焰灼燒滅菌，迅速*。對于接種環(huán)，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也采用通過火焰而達(dá)到滅菌的目的。

培養(yǎng)皿的滅菌

培養(yǎng)皿的滅菌一般有干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌兩種方法。滅菌的具體過程是先將需要滅菌的培養(yǎng)皿用報紙包起來，置于干燥箱內(nèi)加熱到 160°C 滅菌 90-120 分鐘(干熱滅菌)，或在 121°C 高壓滅菌 20-30 分鐘(高壓蒸汽滅菌)，然后放到烘箱中干燥，去除蒸汽凝結(jié)的水。塑料制的培養(yǎng)皿一般都是一次性的，但也有一些塑料培養(yǎng)皿是可以重復(fù)使用的。

槍頭的滅菌

將放入槍頭盒中濕熱滅菌。121 度，15-20 分。為了避免水蒸

氣困擾，可以在槍頭盒外包上報紙，或者滅菌后置于溫箱中干燥。