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流式檢測(cè) T 細(xì)胞增殖的技巧
集中于 T 細(xì)胞的許多基礎(chǔ)和臨床免疫研究包括增殖測(cè)定，都是為了確定 T 細(xì)胞是否能夠在不同的體外或體內(nèi)條件下增殖。流式細(xì)胞儀術(shù)是測(cè)量 T 細(xì)胞增殖的理想方法，現(xiàn)在有一套染色產(chǎn)品，可以在現(xiàn)有的流式細(xì)胞儀染色板中加入增殖染料。與所有流式細(xì)胞術(shù)染色步驟一樣，一定要做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定染色試劑的用量和確定采集的細(xì)胞數(shù)，在下一個(gè) T 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)確定使用其中的一個(gè)染色方案來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的增殖 。
胞內(nèi)熒光染色：
羧基熒光素二乙酸酯琥珀酰亞胺酯（CFSE）或類似的熒光染料是可以進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)的。在增殖期間，隨著細(xì)胞分裂熒光染料的濃度也隨之稀釋，并且可以在流式細(xì)胞檢測(cè)分析時(shí)作為離散峰測(cè)量多次細(xì)胞分裂。當(dāng)您在預(yù)實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)這些染料時(shí)，需確保這些增殖染料不影響細(xì)胞活性或形態(tài)。
DNA 合成：
細(xì)胞增殖還可以通過(guò)胸苷合成類似物 5-溴-2'-脫氧尿苷（BrdU）檢測(cè)細(xì)胞周期 S 期的 DNA 合成量來(lái)測(cè)定。通常在細(xì)胞培養(yǎng)中添加 BrdU 以確定體外增殖，并且使用抗 BrdU 的二抗與細(xì)胞內(nèi)因子結(jié)合來(lái)測(cè)量 BrdU 摻入。
以上 T 細(xì)胞增殖方法的可能有一種更適合您正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，或者可用于您的流式細(xì)胞儀。每種方法都相對(duì)容易應(yīng)用到您的下一個(gè)實(shí)驗(yàn)，并可以根據(jù)該檢測(cè)更好地了解細(xì)胞功能。