您好, 歡迎來到化工儀器網
12
EB注意事項
分子式：C21H20BrN3分子結構
英文名：Ethidium bromide
分子量： 394.3139 g/mol
熔點：260 - 262 °C
為芳香族熒光化合物
EB（Ethidium bromide，溴化乙錠）
溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標準302nm 紫外光透射儀激發并放射出橙紅色信號，可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統拍攝。
溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導致錯配。溴化乙錠是強誘變劑,具有高致癌性! 普通實驗手套（淺黃色乳膠手套）不能很好的阻擋EB，需要用藍色實驗用手套。
觀察瓊脂糖凝膠中DNA常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色，溴化乙錠含有一個可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中，大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入后，其平面基團與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近，導致與DNA結合的染料呈現熒光，其熒光產率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料，而被結合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由于溴化乙錠-DNA復合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20-30倍，所以當凝膠中含有游離的溴化乙錠（0.5ug/ml）時，可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸（DNA或RNA）。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小，所以其熒光產率也相對較低。事實上，大多數對單鏈DNA或RNA染色的熒光時通過染料結合到分子內形成較短的鏈內螺旋產生的。
由于在該染料存在的情況下，線狀DNA的電泳遷移率約降低15%，因此，當需要知道DNA pian段的準確大小（如DNA限制酶酶切圖譜的鑒定）時，凝膠應該在無EB情況下電泳，電泳結束后用EB染色。染色完畢后，通常不需要脫色。但是在檢測小量DNA（小于10ng）片段時，通常要將染色后的凝膠進行脫色。
溴化乙錠的損害
溴化乙錠可以嵌入堿基分子中，導致錯配。溴化乙錠是強誘變劑，具有高致癌性！
SYBR Green I 和溴化乙啶（EB）Ames 測試結果顯示EB容易引起有機體突變。(Singer et al., Mutat. Res. 199, 439: 37- 47.)
溴化乙錠溶液的凈化處理
由于溴化乙錠具有一定的毒性，實驗結束后，應對含EB的溶液進行凈化處理再行棄置，以避免污染環境和危害人體健康。
(1) 對于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處理：
①將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml；
②加入一倍體積的0.5mol/L KMnO4，混勻，再加入等量的25mol/L HCl，混勻，置室溫數小時；
③加入一倍體積的2.5mol/L NaOH，混勻并廢棄。
(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處理：
① 按1mg/ml的量加入活性炭，不時輕搖混勻，室溫放置1小時；
② 用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟棄。