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如何應(yīng)對(duì)常見的細(xì)胞污染？
細(xì)胞污染一般可分為微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、細(xì)菌、支原體等。而真核生物一般是細(xì)胞系間的交叉污染。
細(xì)菌、真菌或酵母的污染很容易辨識(shí)，直接可通過培養(yǎng)基顏色變化、顯微鏡下觀察便可判斷。如細(xì)菌污染后細(xì)胞培養(yǎng)基變黃色，而且鏡下有小黑點(diǎn)，且有規(guī)律的運(yùn)動(dòng)。而酵母污染后培養(yǎng)基變紫色，鏡下可見透明、且連成一串的圓形。但如果是支原體污染的話，由于最開始支原體生長(zhǎng)緩慢，而且顯微鏡下難以看出，因此很難發(fā)現(xiàn)。
真核細(xì)胞污染是指一種細(xì)胞污染了另外一種細(xì)胞，主要發(fā)生在操作不當(dāng)，尤其是長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行某些細(xì)胞系的研究而傳代時(shí)。目前越來越多的科研人員發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞間污染這一被忽略的問題。據(jù)不*統(tǒng)計(jì)，約有 15-20% 的細(xì)胞存在細(xì)胞間污染。
如何應(yīng)對(duì)常見的細(xì)胞污染？
1)細(xì)菌污染：
細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物，其大小以微米(μm)計(jì)。常見的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。
遇到細(xì)菌污染，基本原則是馬上扔掉細(xì)胞，不要擴(kuò)大污染。如果你的細(xì)胞真的十分寶貴，先用帶有雙抗的PBS反復(fù)沖洗幾遍，然后再培養(yǎng)液中加入硫酸慶大霉素、新霉素(50ug/ml)等，培養(yǎng)3天后換成帶有雙抗的培養(yǎng)液培養(yǎng)。
2)真菌污染：
是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種，尤其在梅雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。污染培養(yǎng)細(xì)胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物。
建議預(yù)防為主，在培養(yǎng)箱的水中加入硫酸銅。
3)支原體污染：
支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨(dú)立生活的微生物，支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
支原體污染細(xì)胞后，培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁。多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。