液相色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢增加，屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高，可能的原因有如下幾點(diǎn)：
1、液相色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染。
2、色譜柱頭的填料被樣品污染。
3、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出。
4、流動(dòng)相pH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
液相色譜柱解決辦法如下：
1、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
2、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
3、如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
4、如果因pH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
選擇液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等，
1、樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2、如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對試劑平衡時(shí)間長，對流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3、若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4、如果堿性化合物的極性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬色譜柱在高pH值檢測（優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡單，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高）或者選用液相色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來分析其它樣品，對流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
