骨髓間充質干細胞 ( bone mesenchymal stem cells,BMSCs) 是一種來源于中胚層的多能干細胞,具有多向分化潛能。干細胞在體內生長的局部微環境(包括細胞外基質、細胞因子在內的基質微環境和復雜的力學微環境共同組成) 對其分化走向起重要的調控作用。流 體 切 應 力( fluid shear stress,FSS)對骨重塑、骨基質細胞活性及分化起著十分重要的作用。
研究發現,不同作用形式的 FSS 刺激可以通過調節基質干細胞的基因表達變化,從而調控其生長和分化走向。不同強度 FSS( 0. 2 ~ 10.0 Pa)對人 BMSCs 的遷移調節不一樣。因此,理解 BMSCs 在力學因素作用下的行為,是進一步在組織工程中實現通過力學因素誘導其增殖、分化的基礎。
因此,此實驗利用平行平板流動腔系統對大鼠 BMSCs 施加不同強度 FSS,檢測 Bmi-1 基因表達,并采用不同信號通路的特異性阻斷劑,探討其中可能的力學信號傳導機制。相關研究成果發表在 醫用生物力學 題為《 Akt 調節切應力誘導骨髓間充質干細胞 Bmi-1 基因的表達》。
相關實驗示意圖
實驗結果
1、1.5 Pa FSS 作用不同時間點對 BMSCs 中 Bmi-1 基因表達的影響
Real-time PCR 結果顯示,BMSCs 在流體剪切力作用 1 h 后,Bmi-1 基因表達即明顯增強,兩者之間有顯著性差異( P < 0. 05) ;而且隨著刺激時間的延長,Bmi-1 基因表達也隨之增強( 見圖 1) 。
2、不同強度 FSS 對 Bmi-1 基因表達的影響
與無 FSS 刺激組相比,FSS 加載各組均能明顯增強 Bmi-1 基因的表達,且呈強度依賴,高 FSS 組zui明顯。組間比較發現,Bmi-1 mRNA 的增高,低 FSS 組和中等 FSS 組差異; 而高FSS 組 與 中 等 FSS 組相比又明顯增高 ( P < 0. 05,見圖 2) 。
3、1.5 Pa FSS 激活 BMSCs p-Akt 和 p-ERK
Western blotting 實驗結果顯示,FSS 呈時間依賴性激活 BMSCs Akt 和 ERK 的磷酸化; 其中, FSS 處理后磷酸化水平增加,30 min 達高峰,此后磷酸化水平呈逐漸下降趨勢( 見圖 3) 。
4、不同抑制劑對 Bmi-1 基因表達的影響
結果顯示,加入 DMSO 的單純受力組與同樣加入 DMSO 的靜止組比較,Bmi-1 表達顯著增高; 而加入 wortmannin 組 與 加 入 DMSO 的單純受力組比較, Bmi-1表達被抑制( P < 0. 05) ,但加入 PD98059 組與加入 DMSO 的單純受力組比較,Bmi-1 表達沒有影響( 見圖 4) 。
綜上所述,此研究利用平行平板流動腔系統產生的 FSS,可誘導 BMSCs 中 Bmi-1 mRNA 的表達,并且其表達量與刺激時間和力的強度密切相關,其中Akt 信號分子可能對 Bmi-1 基因的表達調控起關鍵作用。
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