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DNA合成儀的使用方法操作步驟

閱讀:1733      發(fā)布時(shí)間:2016-5-27
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 DNA合成儀的使用方法操作步驟
  
  以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護(hù)堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護(hù)溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:
  
  1)仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時(shí)換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因?yàn)樵撊軇┯昧枯^大。
  
  2)將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
  
  3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。
  
  4)檢查選擇的合成步驟是否正確。
  
  5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。
  
  6)選擇結(jié)束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
  
  7)在每個(gè)柱監(jiān)視器的Username下,輸入你所希望的保存名字。
  
  8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個(gè)收集瓶。
  
  9)打印出每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料。
  
  10)檢查打印出來(lái)的資料是否正確。
  
  11)運(yùn)行StartColumn步驟檢查每一個(gè)柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
  
  12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
  
  13)如果分部收集器用來(lái)收集每個(gè)DMT脫保護(hù)步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開(kāi)分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。
  
  14)啟動(dòng)循環(huán),運(yùn)行開(kāi)始程序清洗試劑管路,除去原來(lái)的試劑。
  
  注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT,并將其從固相載體上切下來(lái),儲(chǔ)存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒(méi)有保護(hù)基團(tuán),將其從固相載體上切下來(lái),儲(chǔ)存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT,寡核苷酸沒(méi)有從固相載體上切下來(lái),而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒(méi)有保護(hù)基團(tuán),寡核苷酸沒(méi)有從固相載體上切下來(lái),而是保留在合成柱中。

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