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      紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司 紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司
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      Corning NK 細胞活化擴增套裝和競爭產品的比較

      閱讀:3044發布時間:2018-2-6

       

      Corning NK 細胞活化擴增套裝和競爭產品的比較

       

      Corning® NK細胞活化擴增培養套裝支持NK細胞的快速擴增,NK細胞產量高(約8.6 萬億,擴增290倍),細胞殺傷力強(效應細胞:靶細胞=5:1 下殺傷力77.9%),與競爭產品相比很有優勢。

       

       

      比較項目

      Corning® NK細胞活化擴增培養套裝

      競爭產品B: NK 試劑盒

      競爭產品C: NK 培養基

      接種容器

      預包被T-75培養瓶

      提供包被劑

      沒有提供培養瓶和包被劑

      組份

      Pre-coated T-75 flask 抗體預包被T75細胞培養瓶

      50 mL NK細胞活化培養基

      1.8 mL NK細胞活化添加劑

      1L  NK細胞擴增培養基

      1mL包被劑

      80mL活化培養基

      2 L擴增培養基+1 mL 添加劑

      500mL 培養基/瓶

      操作友好度

      方法清除,操作簡單

      沒有zui終方法,NK培養需要自行優化

      沒有方法

      抗凝劑兼容性

      肝素,檸檬酸鈉

      肝素

      肝素,檸檬酸鈉

      細胞產量(14天,30mL 血樣)

      約 3 萬億

      約 0.64萬億

      約 4.2 萬億

      擴增倍數

      約100倍

      約32倍

      約140倍

      CD3-CD56+表型,14天

      83%

      68%

      6%

      NK效應細胞數量

      約2.5萬億

      約0.4萬億

      約0.3萬億

      細胞殺傷力(ET=5:1,靶細胞K562)

      77.9%

      54.1%

      57.6%

      培養體積

      1.5L

      1.0L

      1.0L

      周期

      14天

      14天

      14天

       

       

      Corning NK 細胞活化擴增套裝可以用于NK細胞的大量擴增,并且具有高活力和高殺傷能力。Corning NK 細胞活化擴增套裝飽和預包被T-75培養瓶,KBM NK活化培養基,KBM NK活化添加劑和KBM NK擴增培養基。前三個特別設計用于NK活化,zui后一個KBM NK擴增培養基于NK細胞擴增。NK活化培養基和擴增培養基生產都是使用高質量試劑和cGMP級的原料。培養基唯二所含培養基是注射級的血清白蛋白和重組人胰島素。

       

       

       

      介紹

      自然殺傷細胞(NK)是重要的免疫細胞,能識別并清除腫瘤和病毒感染。體外大量培養NK細胞,滿足過繼性免疫治療所需一向比較困難。據資料,現有的培養方法都是采用擴增培養基搭配細胞因子(IL-2,IL-7,IL-15)的方案,需要研究者自行優化后使用。

      Corning NK 細胞活化擴增套裝提供了NK 細胞活化擴增的全套材料和標準操作方法,所得NK細胞擴增能力強,活性和殺傷能力高。研究者無需優化,而且使用步驟精簡。和競爭產品比較了NK細胞產量,活力和NK 細胞體外 陽性表達比率和殺傷能力。

       

      鑒定方法

      免疫表型

      收獲細胞表面標記表達評估方法:CD3-CD56+陽性率。

      100 μL PBS 加入 1 x 106 個細胞,CD3 FITC +CD56 PE抗體染色 20min,染色過程 室溫避光。孵育后,PBS 緩沖液清洗細胞,200 μL PBS 重懸,用于流式細胞分析。每個樣本收集1萬個events,再用histogram overlay subtraction method using BD Accuri C6 軟件。

       

      CCK-8 細胞毒性檢測

       K-562 細胞作為靶細胞。1 x 105 cells/mL的K-562 細胞和 5 x 105 cells/mL的效應細胞共培養(96孔培養板三份,終體積200 μL/孔),37°C 過夜。分析前,每孔添加20 μL細胞計數試劑( Cell Counting Kit-8 solution ,CCK8, Sigma Cat. No. 96992), 37°C ,5% CO2孵育1 h。數據讀取:SpectraMax® M4 (Molecular Devices) multifunction microplate reader。

       

      結果

       

       

      圖1 使用不同品牌的NK擴增試劑盒比較細胞生長曲線和擴增能力。與競爭產品B,C相比,Corning® NK細胞活化擴增培養套裝擴增能力具有優勢。

       

       

       

       

      圖2 CCK-8 細胞殺傷活性檢測。NK細胞與K-562細胞共培養16 h后(效應細胞:靶細胞=5:1 ),Corning® NK細胞活化擴增培養套裝培養的NK 細胞殺傷能力77.9%競爭產品B (54.1%) 和C(57.6%) 有優勢。

       

       

       

       

      圖3 流式細胞分析NK細胞表面標志物。使用CD3-CD56+陽性率評估收獲細胞中NK細胞占比。Corning® NK細胞活化擴增培養套裝占比83.0%高于競爭產品B (67.6%)和C(6.4%)

       

      結論
      Corning® NK細胞活化擴增培養套裝支持NK細胞的快速擴增,NK細胞產量高(約8.6 萬億,擴增290倍),細胞殺傷力強(效應細胞:靶細胞=5:1 下殺傷力77.9%),與競爭產品相比很有優勢。

      Corning NK 細胞活化擴增套裝提供了NK 細胞活化擴增的全套材料和標準操作方法。無需優化,而且使用步驟十分精簡。

       

      原文:Zhu Xuejing, Liu Jian Corning Incorporated

      Corning Life Sciences Asia Technology Center Shanghai 201206, China

       

       


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