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EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans 細胞轉染試劑（高效）

一、產品描述

1.EZ Trans細胞轉染試劑作為新一代的轉染試劑，其轉染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。

2.經過李記生物的優化處理，本產品具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適用范圍廣等特點。

　　3.EZ Trans細胞轉染試劑與Thermo/ Lipo 2000/Invotrigen/ Lipofectamine 2000等產品相比，操作更便捷，詳見使用方法。

二、訂購信息

三、保存方法

冰袋運輸，4℃保存，保質期12個月。不可冷凍！

四、使用方法（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表1）

1. 接種細胞

對于貼壁細胞，轉染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板，每500 µL生長培養基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化合適的使用量。

2. 準備EZ Trans-DNA復合物

⑴對于每孔細胞，將1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養基），混勻。

⑵對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合物。

3. 轉染細胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。

（2）在37℃，5% CO₂培養箱培養6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液，更換新的培養液，繼續培養至對轉入基因表達分析。

【注】：篩選穩定轉染細胞株，轉染細胞24 h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO₂培養箱中孵育24 h，加入篩選培養基。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

五、注意事項

1. 質粒質量：請務必使用高純度無內毒素轉染級質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

2. 細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。

3. 細胞培養液要求： EZ Trans細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養液中不添加抗生素。

4. DNA濃度和EZ Trans細胞轉染試劑量的優化：DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體積EZ Trans細胞轉染試劑進行優化。DNA和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。

表1：不同培養體積對應的待轉DNA、EZ Trans、稀釋液用量

【注】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA（μg）: EZ Trans細胞轉染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5。

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