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9今天來給大家介紹細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，血清解凍的正確方法。
首先，剛拿到的血清，為保證血清中各種細(xì)胞因子的活性，應(yīng)趕緊放進(jìn)-20℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。
當(dāng)需要使用血清時(shí)，從-20℃冰箱中取出后，許多人會(huì)采用直接在4℃冰箱里過夜融化的方法，但在實(shí)際操作中，很多人會(huì)碰上血清出現(xiàn)沉淀或者由于血清中因子活性發(fā)生波動(dòng)，而導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)生波動(dòng)等各種問題。
關(guān)于沉淀析出的原理：
我們都知道，在血清是含有多種大小分子蛋白以及水的混合物。當(dāng)血清融化時(shí)，各種成分融化的速度會(huì)非常不同：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)會(huì)先融化，水這類溶劑會(huì)相對(duì)滯后地融化。因此，在血清融化后半程，我們經(jīng)常會(huì)看到，在瓶子中間剩下一根白色或無色的冰柱，這說明大量蛋白已融化，而水還沒化完，此時(shí)大量蛋白溶于少量的水，沉積在瓶子的底部，有的蛋白質(zhì)就會(huì)飽和析出，呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，而一旦析出，有的蛋白就很難再溶解回去
在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
更重要的一點(diǎn)是，血清中珍貴的生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì)，它們?cè)诮鈨鲞^程中，有著與細(xì)胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷，都需要快速解凍才能較大程度地保留生物活性。顯然，4℃過夜這樣的長(zhǎng)時(shí)間處理，很易導(dǎo)致一部分「營(yíng)養(yǎng)成分」的損失，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
所以，為了更好地保留血清中的活性成分，使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定，國際上一直推薦使用三步法融化，可最大限度減少沉淀出現(xiàn)，保留血清中因子的活性。具體方法見下表，有需要的同學(xué)可以截圖保存。
要點(diǎn)一：此三步融化法，適用于所有血清，在水浴過程中，血清的平面要盡量*浸在水中，但瓶口不要沒入水中，防治瓶口污染。在融化過程中要最好經(jīng)常慢慢搖動(dòng)瓶身，使血清混勻，但搖動(dòng)不要?jiǎng)×遥M量不要產(chǎn)生泡沫！
要點(diǎn)二：如果你的血清平時(shí)是儲(chǔ)存在-80℃的血清，融化前則需提前幾天先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中復(fù)溫（至少24小時(shí)），再使用三步法溶解，避免溫差過大，更易導(dǎo)致血清中蛋白凝集。
要點(diǎn)三：為最大限度保留血清中因子的活性，減少凍融次數(shù)，血清應(yīng)遵循現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)配現(xiàn)解凍的原則。*解凍的血清，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將其分裝，保證每一份夠一次使用量即可，比如：25ml/管、50ml/管等。分裝好的血清，密封好后，立即放回-20℃冰箱繼續(xù)冷凍儲(chǔ)存。需要配制培養(yǎng)基的時(shí)候，再從-20℃冰箱中取出一管來盡快解凍使用（最好能全部配成培養(yǎng)基，不要有剩余），配好的培養(yǎng)基在4℃冰箱儲(chǔ)存最好不超過一周。
好血清，正確用，以市面上*好用的Ausbian品牌進(jìn)口血清為例，十幾年來的好口碑，與十幾年不遺余力地推廣血清的正確使用方法是分不開的。
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