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北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

GoldBio D-熒光素鉀鹽體內(nèi)使用手冊

時(shí)間:2023-7-31 閱讀:1287
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熒光素是一種常見的生物發(fā)光報(bào)告子,用于體外成螢光素酶。這種螢火蟲螢光素酶的水溶性底物(通常來自Photinuspyralis)

利用ATP和Mg2+作為共因子在氧氣的存在。通過ATP的利用,反應(yīng)可以進(jìn)一步用于指示能量或生命的存在是為了起到生死攸關(guān)

的污點(diǎn)的作用。

螢火蟲螢光素酶是研究基因最chang用的報(bào)告基因之一表達(dá)由于其ji端的敏感性,以及快速,易于使用的系統(tǒng)。螢光素酶用于監(jiān)測

細(xì)菌、培養(yǎng)細(xì)胞以及轉(zhuǎn)基因植物或動(dòng)物。它是一種約61kDa的蛋白質(zhì),作為單體具有活性,不需要加工其活動(dòng)。螢火蟲螢光素

通過催化熒光素的氧化羧化作用產(chǎn)生具有任何已知生物發(fā)光中最gao效率之一的反應(yīng)。螢光素活性可以通過與啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的

相關(guān)性來表征基因調(diào)控元素。優(yōu)化后化學(xué)發(fā)光反應(yīng)和調(diào)節(jié)元件的轉(zhuǎn)錄活性。

本手冊旨在介紹一種簡單、經(jīng)濟(jì)、可靠的方法,用于在體外報(bào)告系統(tǒng)中檢測熒光素酶活性。

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生物發(fā)光反應(yīng):

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幾個(gè)因素可能會(huì)影響反應(yīng)的靈敏度,包括溫度、pH或底物濃度我們建議使用pH為7.8的緩沖液,并在使用前將所有試劑預(yù)熱

溫,以獲得最佳結(jié)果。GoldBio還建議添加在測定緩沖液中過量的ATP和Mg2+用于更好的反應(yīng)。

當(dāng)熒光素被添加到螢光素酶樣品中時(shí),會(huì)立即產(chǎn)生閃光在0.3-0.5秒內(nèi)達(dá)到峰值強(qiáng)度。然后,光線開始迅速衰減一半壽命約為0.5

-1.0分鐘。但當(dāng)輔酶A最初加入測定緩沖液時(shí)能夠防止快速反應(yīng)衰變延長了反應(yīng)2-5分鐘。如果稍后添加到反應(yīng)中混合物,輔酶A也促進(jìn)額外的二次閃光。

Gold Bio推薦基于Yuichi Oba等人(2003):

-100mM Tris-HCl(pH 7.8)

-5mM MgCl2

-250μM CoA

-150μM ATP(Fraga,2008)

-150μg/mL d-熒光素(GoldBio)

一些研究人員還添加了二硫蘇糖醇(DTT)或EDTA等成分(Steghans,1998)。您可以調(diào)整您的特定分析緩沖液以達(dá)到最

效果滿足您的需求。我們建議對您的特定細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)力學(xué)曲線的初步測試以獲得最佳效果。

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GoldBio  D-熒光素鉀鹽體內(nèi)使用手冊提供者——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:

一、輻射五大服務(wù)方向:

1.國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理;

2.國外試劑訂購(直訂,或境外代理);

3.基因組測序(二代,二代+三代);

4.基因分型(SNP檢測):低/中/中 高通量項(xiàng)目;

5.生物樣本運(yùn)輸(國內(nèi)、);

二、多家代理品牌,涉及30多種較有名品牌,經(jīng)營代理500多個(gè)品牌:

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

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