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北京百奧創新科技有限公司

三一造血CIK 細胞高效擴增試劑盒(CT-009)產品介紹

時間:2024-3-12 閱讀:1097
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產品簡介:

細胞因子誘導殺傷性細胞(CIK 細胞)是一個異質細胞群,包含 CD3+CD56+NK 樣 T 細胞和CD3+CD8+細胞毒性殺傷作用 T 細胞,具有殺傷腫瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特點, CIK 細胞對各種腫瘤尤其是對低表達 MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本試劑盒可以從單個核細胞(MNC)在體外高效擴增成 CIK 細胞,為免疫學研究提供了一個有力工具。

產品特點:

· 成份明確,無異源成份

· 無菌,無支原體,低內毒素

· 同時適用于膠血與外周血

· 14天培養后,細胞活率在90%以上wan全無血清培養,使用更安全

· 殺傷活力強,主要成分為NK樣T細胞及細胞毒性T細胞

操作方法:

一、血漿的提取與保存

1.將取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 離心管中,室溫下 650g,離心 15min;

2.取上層黃色血漿部分于新的 50mL 離心管中(下層為血液細胞成分,用于后續單個核細胞的提?。?;

3.將血漿置于 56°C 水浴鍋中滅活 30min;

4.血漿滅活完畢后,可見血漿呈現渾濁狀,900g,離心 10min;

5.取上清,于 4°C 保存待用。

二、單個核細胞的提取

1.取血漿提取步驟的下層紅色細胞沉淀,加入生理鹽水或 PBS 至原體積;

2.取 2 支 50mL 離心管,分別加入 15mL 淋巴細胞分離液,并將 1 步驟中的稀釋血液分別緩緩鋪加到淋巴細胞分離液的上層;

3.室溫下,800g 離心 20min(升速 1-5,無閘減速);

4.離心后,離心管中樣品由上到下分為 4 層:血漿層-白膜層-人淋巴細胞分離液層-紅細胞與粒細胞的沉淀。分別小心吸取白膜層及其以下約一半的液體于新的離心管中,并加入生理鹽水或PBS 至 40mL 體積,混勻,300g 離心 10min;

5.棄上清,沉淀再次用 40mL 的生理鹽水或 PBS 重懸,300g 離心 10min;

6.棄上清,沉淀用少許 CIK 細胞無血清培養基重懸,合并,取部分細胞懸液計數,備用。

三、單個核細胞接種與補液

1.第0天,配制50mL CIK 細胞wan全培養基:CIK 細胞無血清培養基 45mL,10%已熱滅活的自體血漿(5mL),CIK-I 100μL,CIK-II 100μL 以及終濃度為 1000IU/mL 的 IL-2。將制備好的單個核細胞(MNC)按 1.5M cells/mL 的細胞密度接種于 50mL 已配制好的 CIK 細胞wan全培養基中,混合均勻后轉移至 T75 瓶中,而后將 T75 瓶轉移至 5%二氧化碳培養箱 37°C 培養;

2.第 3 天(3×24h),補加 CIK 細胞無血清培養基 95mL,5%已熱滅活的自體血漿(5mL)以及 IL-2(IL-2 終濃度為 1000IU/mL),轉入細胞培養袋,此時培養袋含 150mL 培養基;

3.第 5 天,補加 CIK 細胞無血清培養基 150mL,1%已熱滅活的自體血漿 1.5mL 以及 IL-2(IL-2終濃度為 1000IU/mL),此時袋子含 300mL 培養液;

4.第 7 天,補加 CIK 細胞無血清培養基 300mL,剩余的所有自體熱滅活血漿以及 IL-2(IL-2 終濃度為 1000IU/mL),然后分成兩袋,此時每個袋子約含 300mL 培養液;

5.第 9 天,分別往每個培養袋補加 CIK 細胞無血清培養基 300mL 以及 IL-2(IL-2 終濃度為1000IU/mL),此時每個袋子約含 600mL 培養液;

6.第 11 天,分別往每個培養袋補加剩余 CIK 細胞無血清培養基以及 IL-2(IL-2 終濃度為1000IU/mL),此時每個袋子約含 1000mL 培養液;

7.第 13-14 天,收獲 CIK 細胞。

產品選購:

貨號

產品名稱

規格

CT-009

CIK   細胞高效擴增試劑盒

2L/



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