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一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

英諾思(immuno-X)人CD3/CD28激活磁珠用于激活人T細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞增值和T細(xì)胞分化。該產(chǎn)品利用三維立體磁珠模擬抗原呈遞細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的激活，ActBeads™ 提供的第一信號(hào)（CD3）和第二信號(hào)（CD28）使得T細(xì)胞高效擴(kuò)增，避免T耗竭。
• ActBeads™ 激活磁珠濃度為4x107個(gè)/mL
• 磁珠粒徑均yi，流式細(xì)胞儀分析時(shí)可與T細(xì)胞明顯區(qū)分

二、試劑盒組分

產(chǎn)品名稱	存儲(chǔ)條件	緩沖液成分	功能
ActBeads™ Human CD3/CD28 Activator	4°C保存，避免冷凍	PBS, 0.1% BSA	通過磁珠偶聯(lián)的CD3/CD28抗體激活T細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞增值和分化

BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline

運(yùn)輸條件： 4°C運(yùn)輸

三、培養(yǎng)條件

·緩沖液：RPMI1640 培養(yǎng)基+10% FBS + 2 mM L-Glutamine+100 U/mL penicillin/streptomycin

·細(xì)胞因子：人IL2細(xì)胞因子

四、溫馨提示

·T細(xì)胞分離時(shí)，確保FACS Buffer滲透壓穩(wěn)定，免疫細(xì)胞對(duì)滲透壓非常敏感

·IL7、IL15可與IL2聯(lián)合使用，促進(jìn)T細(xì)胞增值

五、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 激活或者擴(kuò)增T細(xì)胞

步驟	說明
1	分離人T細(xì)胞，將其鋪到96孔平底培養(yǎng)板中，細(xì)胞密度為8 x 104/孔，培養(yǎng)基200 μL
2	ActBeads™ 人CD3/CD28激活磁珠震蕩混勻后，加入到細(xì)胞中，2 μL/孔 Note: 激活或擴(kuò)增T細(xì)胞時(shí)，ActBeads TM和細(xì)胞比例為1:1；誘導(dǎo)Treg細(xì)胞分化時(shí)，磁珠和細(xì)胞的比例應(yīng)增加到2:1
3	加入IL2細(xì)胞因子，終濃度為100 U/mL
4	進(jìn)行T細(xì)胞培養(yǎng)，5% 二氧化碳，37℃
5	培養(yǎng)48小時(shí)后，T細(xì)胞體積變大，形態(tài)多樣
6	當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，更換新鮮培養(yǎng)基或者將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)板

2. T細(xì)胞重新刺激

通常T細(xì)胞在擴(kuò)增到第7-10天時(shí)，需要通過添加新鮮的ActBeads™ 和IL-2進(jìn)行多次重新刺激。經(jīng)過反復(fù)重新刺激后，CD8+ T細(xì)胞仍保持細(xì)胞毒性。

步驟	說明
1	將T細(xì)胞重懸后置于無菌離心管中，在磁力架上吸附2分鐘
2	倒出/吸出T細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)
3	將T細(xì)胞重新鋪到培養(yǎng)板中，密度0.5–1 × 106 cells/mL
4	培養(yǎng)，5% 二氧化碳，37℃