ZETA LIFE高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞成功案例

品牌：ZETA LIFE

名稱：advanced 轉(zhuǎn)染試劑

規(guī)格：0.25ml；0.5ml；0.75ml；1.5ml

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞（RAW264.7）是通過(guò)Abelson鼠白血病病毒誘導(dǎo)BALB/c小鼠產(chǎn)生腫瘤后得到的細(xì)胞株。其在醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用十分普遍，是許多白血病相關(guān)研究模型的常用細(xì)胞株，在微生物學(xué)、免疫學(xué)等研究中也十分常用。但RAW264.7細(xì)胞形態(tài)和分化狀態(tài)多變，在實(shí)際培養(yǎng)中較難把握，給科研工作帶來(lái)了一定困難；且RAW264.7細(xì)胞很難轉(zhuǎn)染，許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉(zhuǎn)不進(jìn)去，或者僅有不到10%的轉(zhuǎn)染效率。因此RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染方法就很值得去探討，本文就這些方面進(jìn)行介紹，以供科研工作者借鑒。

RAW264.7細(xì)胞的形態(tài)特征

很多人養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞出現(xiàn)偽足；就連ATCC的描述也稱RAW264.7細(xì)胞形態(tài)多樣，可有圓形、類圓形，以及長(zhǎng)出偽足的長(zhǎng)梭形、多邊形，可單核可多核。而實(shí)際，有偽足的情況是RAW264.7細(xì)胞受到外界刺激進(jìn)行了分化，是細(xì)胞衰老、分化的表現(xiàn)；RAW264.7細(xì)胞的“較佳”形態(tài)應(yīng)是較小的單核圓形細(xì)胞。

RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)條件

RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境與一般貼壁細(xì)胞并無(wú)差異。即培養(yǎng)箱溫度為37℃，CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養(yǎng)基為DMEM+10%的胎牛血清；實(shí)際上，經(jīng)研究者們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高糖型DMEM培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁更快、細(xì)胞生長(zhǎng)速度更快。因此，推薦使用高糖型DMEM，F(xiàn)BS濃度為10%，作為RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基。

RAW264.7細(xì)胞的傳代

關(guān)于RAW264.7細(xì)胞的傳代方法，ATCC推薦使用細(xì)胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細(xì)胞刮刀進(jìn)行傳代時(shí)，細(xì)胞能大限度被收集起來(lái)，但會(huì)對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性損傷、影響細(xì)胞形態(tài)及貼壁時(shí)間等。采用胰酶消化時(shí)，由于RAW264.7細(xì)胞貼壁較牢，消化時(shí)間就較長(zhǎng)。但消化時(shí)間點(diǎn)不易把握，易消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)造成抑制。

因此，推薦使用彎嘴吸管吹打進(jìn)行傳代。具體做法是，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到傳代密度時(shí)，先棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS洗滌兩次，用彎嘴吸管吸取培養(yǎng)基，均勻、稍用力吹打瓶底，即可將細(xì)胞吹打下來(lái)（吹不下來(lái)的就不要了），離心后重懸即可分瓶培養(yǎng)。2 h后可見細(xì)胞貼壁。

由于RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度較快，一般1-2d換液1次，密度長(zhǎng)至60%-70%左右即可傳代，傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久，細(xì)胞生長(zhǎng)密度過(guò)大，細(xì)胞也容易發(fā)生分化，出現(xiàn)長(zhǎng)偽足的多形細(xì)胞。

RAW264.7細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇

RAW264.7細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇方法與一般貼壁細(xì)胞并無(wú)較大差別。但由于RAW264.7細(xì)胞對(duì)外界刺激較敏感，對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求較高，許多人建議降低DMSO的濃度，增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養(yǎng)基（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞的培養(yǎng)及其在誘導(dǎo)破骨細(xì)胞中的應(yīng)用，許丹等，中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2016, 10, 22, 10）。

 RAW264.7細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染成功案例詳見下圖：

河北醫(yī)科大學(xué)科研者提供

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