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上海徠同生物科技有限公司

常見實驗項目樣本收集、保存、運輸要求

時間:2021-11-25閱讀:2280
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一、分子生物學平臺



1. 熒光定量PCR樣本收集運輸



A.細胞:



a.貼壁細胞

6孔板培養的細胞為例,吸掉培養基,用PBS洗一次,吸掉PBS,加1ml  Trizol,將底部細胞吹打起來,轉入1.5mlEP管,裂解細胞。-80度凍存,干冰運輸。



b.懸浮細胞

將培養基及細胞轉入1.5 mLEP管,50003 min離心,離心完吸掉上清,加1 mL  Trizol,吹打混勻,裂解細胞。-80度凍存,干冰運輸。



c.貼壁細胞和懸浮細胞混合

將底部細胞吹打起來,轉入1.5 mL EP管,50003 min離心,離心完吸掉上清,加1 mL  Trizol,吹打混勻,裂解細胞。-80度凍存,干冰運輸。



B.組織:

客戶提供的組織,質量請勿低于100 mg,約黃豆粒大小,可直接-80度凍存,干冰運輸,也可加入1 mL Trizol后,再行-80度凍存,干冰運輸



C.骨類:

液氮條件下粉碎,之后再加入1 mL Trizol研磨,-80度凍存,干冰運輸。



D.其他形式樣本:

 

a.血清、血漿、尿液樣本

請提供至少1 mL樣本;請在采集樣本時立即加入專&trizol,推薦使用invitrogen公司的Trizol LS

該產品的使用比例為樣本體積:Trizol體積=1:3-80度凍存,干冰運輸。液體樣本不建議直接凍存,請一定在采集樣本時加入專&trizol再行凍存寄送。



b.全血

新鮮抗凝全血,按照1:3加入紅細胞裂解液,裂解10 min12000 3 min離心,倒掉廢液,留存管底外周血單個核細胞沉淀,加1 mL  Trizol,吹打混勻,-80度凍存,干冰運輸。



2.ELISA/生化檢測樣本收集運輸

(1) 組織樣品:黃豆粒大小組織樣本,凍存,低溫液氮或干冰運輸。

(2) 血清 24小時內處理:全血樣品于室溫放置2h4℃靜置過夜,1000 r/min離心20 min,取上清待測。

(3) 血漿 24小時內處理:用抗凝管收集血樣或往血樣品中加抗凝劑,1000 r/min離心15 min,取上清待測。

(4) 細胞培養上清:取細胞培養上清1000 r/min離心20 min,取上清待測。

(5) 其他液體樣品 如尿液,透析液等 1000 r/min離心20 min,取上清待測。



注意:

a.樣品處理后的上清可-20℃保存1個月或-80℃保存6個月;

b.如果取得上清比較渾濁,可稍微提高轉速將上清再次離心。



二、Western Blot平臺



1.樣本種類

細胞 、動物組織如心、肝、脾、肺、腎、胰、角膜、血管、脊髓、腦等



2.樣本收集



(1)組織樣本:

客戶提供的組織,質量請勿低于100 mg,約黃豆粒大小,可-20度凍存,干冰運輸。



(2)細胞樣本:

a.貼壁細胞,數量不低于1*10^6個,將細胞用胰酶消化下來轉入EP管,5000 rpm離心3 min,去上清,加入1 mLPBS重懸后轉入新的1.5 mL EP管中,5000 rpm離心3 min,去上清后,PBS再次洗滌一次,留取細胞沉淀,-20℃保存,干冰運輸。



b.懸浮細胞,數量不低于1*106個,將培養基及細胞轉入EP管,5000 rpm離心3 min,去上清,加入1 mL PBS重懸后轉入新的1.5 mL EP管中,5000 rpm離心3 min,去上清后,PBS再次洗滌一次,留取細胞沉淀,-20℃保存,干冰運輸。



(3)蛋白樣本:

客戶自己提取好的蛋白樣本,蛋白濃度應不低于2 μg/μl-20℃保存,干冰運輸。



三、細胞平臺



1.活細胞

加滿培養基;用不透氣培養瓶;常溫或4℃運輸;培養瓶外用自封袋給予包裝;細胞量在60-80%為宜;快遞最好能在2天內到貨;



2.凍存細胞

干冰運輸,最好提供2管凍存細胞。



注意:

a.凡是需要我司進行培養的細胞都要求無菌;

b.直接實驗的細胞必須保證細胞量;

c. 流式檢測的細胞須告知是否攜帶有熒光標記。



四、病理學平臺



1. 常規病理樣本



(1)固定樣本:

a.取材后立即固定,固定時間超過半年的樣本做免疫組化或免疫熒光效果可能不好;

b.固定液體積至少為組織5倍以上,灌注固定的組織除外;

c.業務員對于客戶組織的最終包埋切面要問詢清楚,如果溝通不清楚可以當場給技術員電話讓技術員跟客戶溝通清楚是否可以達到客戶要求,或者將客戶樣本取回讓技術員看到樣本后再跟客戶進行細節溝通;

d.固定好的組織只能放在常溫或4度冰箱保存,絕不能放在-20度冰箱保存; e. 如果現場驗視客戶組織樣本處理不符合處理標準,如有的組織外觀破爛不完整,包埋切片后達不到客戶要求,要當場給客戶說明不能接收;



(2)蠟塊:

取樣時跟客戶核對清楚蠟塊數量,常溫運輸;



(3)石蠟切片:

a.石蠟切片的保存與運輸條件為常溫或4度。

b.玻片應用專&用的盒子裝好,并固定,避免運輸過程中切片碎掉;



2. 透射電鏡樣本



(1)組織樣本:

取材時應盡可能小,一般要求米粒大小,取材后立即用2.5%戊二醛或電鏡專&用固定液固定,4℃保存,不可常溫或冰凍保存,運輸過程中應加入冰袋,且避免樣本與冰袋直接接觸;



(2)細胞樣本:

細胞量要求1*106個,細胞消化離心后轉移至1.5 mLEP管,PBS3遍后棄去PBS,向細胞沉淀中加入1 mL 2.5%戊二醛或電鏡專&用固定液,然后輕輕將細胞沉淀吹散,4℃保存,不可常溫或冰凍保存,運輸過程中應加入冰袋,且避免樣本與冰袋直接接觸;



3. 抗體

(1)一抗的運輸條件為4度冰盒運輸;

(2)二抗及二抗試劑盒的運輸條件為4度冰盒運輸;

(3)若客戶提供的一抗種屬來源不是大鼠、小鼠、兔、山羊,則需要客戶提供對應的二抗。

 


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