Seahorse XF 細胞線粒體壓力測試

 全面了解線粒體功能

1、實驗背景

 安捷倫 SeahorseXF 細胞線粒體壓力測試通過在 Seahorse XFe 和 XF 細胞外流量分析儀上直接測量細胞的氧消耗速率（OCR）來表征線粒體功能的關鍵參數。它是基于培養板的活細胞實驗，能夠實時監測 OCR。   

   實驗使用 XF 傳感器探針板內置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調節劑加入細胞孔中，從而得到反映線粒體功能的關鍵參數。實驗試劑盒里的調節劑為寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，FCCP），魚藤酮（Rotenone）和（Antimycin A）。

圖1  安捷倫SeahorseXF細胞線粒體壓力測試曲線，展示線粒體功能的關鍵參數

圖 2  安捷倫 SeahorseXF 細胞線粒體壓力測試 ETC 的調節劑，闡述電子傳遞鏈（ETC）復合物，并顯示 Seahorse XF細胞線粒體壓力測試試劑盒包含的所有調節劑的作用靶點。

寡霉素抑制 ATP 合酶（復合物 V），是實驗中在基礎測量之后第一次注射的化合物。它影響或減少通過 ETC 的電子流，導致線粒體呼吸或 OCR  減少。減少的 OCR 與細胞 ATP 的產生相關。

羰基氰-4(三氟甲氧基)苯腙（FCCP）是一個解偶聯劑，它破壞質子梯度和線粒體膜電位。它是寡霉素后第二次注射的化合物。加入的結果是，通過ETC的電子流不受限制，復合物IV耗氧量達到最大。FCCP激發的OCR可用來計算備用呼吸能力，它的定義是最大呼吸和基礎呼吸的差值。備用呼吸能力衡量細胞對增加的能量需求或壓力的反應能力。

第三次注射的是復合物I的抑制劑魚藤酮和復合物III的抑制劑xxx的混合物。它們聯合關閉了線粒體呼吸，從而能夠計算由線粒體外的過程驅動的非線粒體呼吸。