丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與TBA反應生成紅棕色的三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二-酮),其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中最主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的最大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug/g,根據植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol/L。
艾美捷丙二醛(MDA)elisa檢測試劑盒#EKF60157詳細信息:
編號:EKF60157
規格:48T/96T
反應性:鼠
范圍:7.813-500ng/ml
靈敏度:4.688ng/ml
應用:用于血清、血漿、組織勻漿和其他生物液中MDA的定量檢測。
儲存:2-8°C,保存6個月
有效期:見試劑盒標簽
注:僅供研究使用。
丙二醛(MDA)elisa檢測試劑盒操作步驟:
步驟1:在預涂板上分別設置標準、試樣、對照(空白)孔,然后記錄它們的位置。
第2步:在每個孔中加入50ul標準品或樣品。立即向每個孔中加入50ul生物素標記的抗體,輕輕敲擊
平板以確保充分混合,然后在37°C下孵育45分鐘。
清洗步驟:抽吸并清洗盤子3次。
步驟3:向每個孔中加入100ul SABC工作溶液,并在37°C下孵育30分鐘。
清洗步驟:抽吸并清洗盤子5次。
第4步:添加90ul TMB基質溶液。在37°C下培養10-20分鐘。
步驟5:添加50ul停止溶液。在450nm下立即讀取并計算
分析程序:
稀釋樣品和試劑時,必須將它們完-全、均勻地混合。在向井中加入TMB之前,平衡TMB
基板在37°C下放置30分鐘。建議為每次測試繪制一條標準曲線。
1.在預涂板上分別設置標準、試樣、對照(空白)孔,然后記錄其位置。它是建議測量每個標準品和樣品一式兩份。
2.添加樣品和生物素標記的抗體:每孔添加50ul標準、空白或樣品。空白井添加樣品/標準稀釋緩沖液。立即向每個孔中加入50ul生物素標記的抗體工作溶液。封面為我們提供的封板機。輕輕拍打盤子,確保充分混合。在37°C下培養45分鐘。(解決方案添加到微孔板的底部,盡可能避免內壁接觸和起泡。)
3.洗滌:取下蓋子,用洗滌緩沖液洗滌板3次,并讓洗滌緩沖液在孔中停留1分鐘每次。最后一次洗滌后,通過抽吸或潷析去除任何剩余的洗滌緩沖液。
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