Melanopsin在非洲爪蛙的黑素細胞(光敏皮膚細胞)中被發現是一種新型視蛋白。然后發現Melanopsin也存在于小鼠視網膜中,特別是在神經節細胞中,并且它介導非視覺光感受任務。Melanopsin也由Opn4編碼,在各種生物體中具有直系同源物。Melanopsin-SAP特異性地消除表達Melanopsin的固有光敏視網膜神經節細胞(ipRGC)。ipRGC具有驚人的長過程,參與明暗感知,是晝夜節律的決定因素。
Melanopsin-SAP是親和純化的兔多克隆抗體對小鼠Melanopsin和核糖體滅活蛋白saporin的化學偶聯物。它特異性地消除表達Melanopsin的固有光敏視網膜神經節細胞(ipRGC)。
Melanopsin-SAP [IT-44, KIT-44]:一種用于消除小鼠固有光敏視網膜神經節細胞中表達黑視蛋白的細胞的工具;通過親和純化的兔多克隆抗體靶向小鼠黑視蛋白,通過皂苷消除。
特異性和制備:
這種靶向毒素識別小鼠固有光敏視網膜神經節表達黑色素的細胞(ipRGCs)。黑色素蛋白SAP是一種親和純化兔的化學偶聯物抗小鼠黑素的多克隆抗體(Cat.#AB-N39)和核糖體失活蛋白saporin(Cat。#PR-01)。
用途:
黑色素素SAP特異性清除本質光敏視網膜神經節細胞(ipRGCs)表達黑色素蛋白酶。Melanopsin-SAP的使用和效果在G?z等人。
材料的批量變化;工作稀釋度必須由最終用戶確定。如果這是一個新的地段,在開始一個完整的實驗方案之前,你必須評估正確的工作稀釋度
saporin/抗黑素(UF008)綴合物(目錄#IT-44)以劑量依賴的方式破壞培養的RGC-5細胞。穩定表達或不表達RGC-5細胞的培養物小鼠黑色素蛋白酶暴露于黑色素蛋白SAP 4天。偶聯物的濃度顯示在每列的上方實驗一式三份。每個面板代表從單個井中隨機選擇的場。
儲存:
使用前,在微型冰箱中輕輕旋轉材料5-10秒。將材料儲存在未稀釋的環境中在–20°C下進行1-2個月的等分試樣。為了長期儲存,將材料儲存在–80°C的溫度下。材料應為等分到方便的體積和數量,以避免重復冷凍和解凍,從而損壞蛋白質含量。在這些條件下,該材料具有非常穩定的保質期。解凍應在室溫或在冰上。解凍后的溶液在使用前應保持在冰上。不要將還原劑(如二硫代蘇糖醇、β-巰基乙醇或抗壞血酸)與此材料一起使用。它會使毒素失活。這種物質是一種極其強效的細胞毒素。應由經驗豐富的人員進行處理。手套和搬運本產品時需要佩戴安全眼鏡。處置時必須小心;高壓滅菌或暴露至0.2M的氫氧化鈉將使材料失活。所有與此材料接觸的實驗室用品應該是一樣的。
參考文獻:
1. G?z D, Studholme K, Lappi DA, Rollag MD, Provencio I, Morin LP (2008) Targeted
destruction of photosensitive retinal ganglion cells with a saporin conjugate alters the effects of
light on mouse circadian rhythms. PLoS ONE 3(9):e3153.
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