GelRed是一種穩定、安全、靈敏的核酸熒光染料,通過靜電及電荷相互作用結合到核酸上,可直接替代劇毒的溴化乙錠(EB),且靈敏度遠高于EB,常用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中dsDNA(雙鏈DNA)、ssDNA(單鏈DNA)或RNA的染色。GelRed結合單鏈DNA和RNA熒光信號約是結合雙鏈DNA的一半左右。
經過一系列的測試,GelRed對于手套和細胞膜都是不能穿透的。在濃度遠高于凝膠染色工作濃度的情況下,染料也是無細胞毒性和非誘變性的。
GelRed 是如何工作的?
與溴化乙錠一樣,GelRed 是一種嵌入 DNA 的核酸染料。GelRed 僅通過嵌入結合。
當顯示紫外光時,嵌入的 GelRed 會發出熒光,產生明亮的橙色光。 兩種產品的光譜幾乎相同; 然而,GelRed 被認為是比 EtBr 更安全的替代品,而且更敏感。 GelRed 的另一個好處是它能夠與 dsDNA、ssDNA 和 RNA 一起工作,而對于 dsDNA,它的靈敏度是 ssDNA 和 RNA 的兩倍。
比較GelRed和溴化乙錠(EB)在1%瓊脂糖預制凝膠(TBE緩沖溶液)中的染色效果。使用1kb Plus DNA Ladder樣品兩倍梯度稀釋上樣,各泳道上樣量從左到右依次為200ng,100ng,50ng和25ng。使用300nm激發的凝膠成像系統和EB濾光片成像并使用Polaroid 667黑白打印
如果 GelRed 是一種嵌入劑,為什么它沒有與溴化乙錠相同的風險?
如果它仍然要直接與 DNA 結合,想知道它如何才能真正安全似乎是合乎邏輯的。 雖然 GelRed 和 EtBr 都嵌入 DNA,但 GelRed 的創建使其不會穿透細胞膜。 因為它不能穿透細胞膜,所以 GelRedTM 對活細胞沒有毒性。
GelRed:用于聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)的核酸凝膠染色劑
原始的GelRed®染料的安全性部分得益于其較大的分子尺寸,這使得該染料對于細胞膜具有不可滲透性。然而,這種大分子尺寸也會降低GelRed® 染料進入密集的聚丙烯酰胺凝膠的能力。為了解決這個問題,Biotium采用了一種新方法,使得新版本的PAGE GelRed®染料具有細胞膜不可滲透性,而不會使其分子尺寸過大
PAGE GelRed®核酸凝膠染料:
• 一種安全而敏感的聚丙烯酰胺凝膠染料
• 在AMES試驗中無毒性和無致突變性
• 水基配方,不滲透乳膠和丁腈手套
• 對水生生物無毒,可由EPA Title 22危險廢物測試進行排放處置。
為什么 GelRed 會改變 DNA 的遷移?
GelRedTM 影響 DNA 遷移的原因有很多。 請記住,所有核酸染料都會對 DNA 的移動方式產生一定的影響。 GelRedTM 是一種比 EtBr 重得多的染料,GelRed 對 DNA 的親和力意味著凝膠中加載的 DNA 越多,GelRedTM 與 DNA 結合并扭曲該片段的運動的次數就越多。
一些防止或最小化 GelRed對遷移影響的建議是: 將其用作后染色劑(我們對此再強調不過分)。 確保您的 GelRed 儲備溶液已適當稀釋。 您可能還需要減少您使用的 DNA 量,以盡量減少遷移干擾的影響。
GelRed 和 GelGreen 有什么區別?
1.每種產品的熒光。 如您所料,GelRed 會發出類似于溴化乙錠的紅色熒光。GelGreen 會發出與 SYBR Green 非常相似的綠色熒光。 任何一種產品都可以與紫外線透射儀一起使用。
2.染色敏感性。 GelRed 是一種比 GelGreen 更敏感的染色劑(靈敏度大約是 GelGreenTM 的五倍),尤其是對于單鏈核酸。
3.在應用方面,GelRed與聚丙烯酰胺凝膠兼容,但不推薦用于 GelGreen。
4.使用 GelGreen 的一個優點是它與藍光透射儀的兼容性,如果您想避免紫外線照射,這將很有幫助
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