FlyCut™ 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 FlyCut™ 快速內切酶在通用的 CutOne™ 或 CutOne™ Color Buffer 中都具有優良的活性，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。此外，百時美去磷酸化、連接試劑在 CutOne™ Buffer 中均具有活性，支持一管化反應，提升“酶切 - 修飾 - 連接”的體驗。CutOne™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。CutOne™ Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

艾美捷快速內切酶DpnII：

Cat #: C-BSM533

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

快速內切酶DpnII組分：

推薦反應條件

1xCutOne“”緩沖區；37°C培養；有關反應設置，請參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養20分鐘。

質量控制

功能測試

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育15分鐘，反應20μl，瓊脂糖凝膠電泳測定完-全消化。

長時間培養/星形活性測定

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”緩沖液中，在37°C下孵育3小時，進行20μl反應，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，產生無可檢測核酸酶降解的DNA模式。較長的孵化時間可能導致恒星活動。

結扎和清算

在37℃下用FlyCut“”Dpnll消化10倍后，>95%的DNA片段可以與22°C的T4 DNA配體連接。在這些連接的片段中，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，>95%可以用FlyCut“Dpnll重新切割。

非特異性核酸內切酶活性

在含有1μg超螺旋質粒和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”緩沖液中進行20μl反應，在37°C下孵育4小時，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，轉化為刻痕或線性形式的轉化率<10%。

在推薦的反應條件下，該酶可在5~15分鐘內消化單位底物。酶的最適反應溫度為37°C。

當底物DNA被DAM甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

當底物DNA被EcoBI甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶在80°C下保溫20分鐘即可熱滅活，保溫3小時不顯示星形活性，但保溫時間較長可能會產生星形活性。