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Abbexa/艾美捷人Asprosin ELISA試劑盒,體外定量測定

時間:2024/1/9閱讀:129
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Asprosin 是哺乳動物在其脂肪(白色脂肪)組織中產生的一種蛋白質激素,可刺激肝臟 將葡萄糖釋放到血液中。在這些組織中,asprosin 由基因 FBN1 編碼,該基因也編碼蛋白質 原纖維蛋白。在肝臟中,asprosin 通過環磷酸腺苷 (cAMP) 依賴性途徑激活快速葡萄糖釋放。 Asprosin 最初由 Batul Chopra 博士和貝勒醫學院的同事鑒定為 端切割產物 FBN1基因產物profibrillin。他們在兩名先天性部分脂肪營養不良患者中發現了FBN1基因突變,并且 早衰樣外觀。這兩名患者是Lizzie VelasquezAbby Solomon。這些患者中 FBN1 蛋白的截斷 被認為對蛋白質產生有兩個后果:突變/截短的原纖維蛋白和非常低的血漿 asprosin 水平 (來自假設的顯性負面影響)。此后,這種情況被命名為馬方樣-早衰-脂肪營養不良綜合征。

 

Abbexa/艾美捷人Asprosin ELISA Kit是一種ELISA試劑盒,用于體外定量測定血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、細胞裂解物和其他生物體液中人Asprosin的濃度。低水平的阿斯普羅辛可用于指示馬凡脂肪營養不良綜合征,高水平的阿斯普羅辛可以在肥胖患者中發現。

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AbbexaAsprosin ELISA試劑盒檢測原理:

該試劑盒基于夾心酶聯免疫吸附測定技術。將抗體預包被到 96 孔板上。將標準品、測試樣品和生物素偶聯試劑加入孔中并孵育。然后加入HRP偶聯試劑,孵育整個板。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的偶聯物。TMB 底物用于定量 HRP 酶促反應。加入TMB底物后,只有含有足夠FBN1的孔才會產生藍色產物,然后在加入酸性終止溶液后變為黃色。黃色的強度與板上結合的 FBN1 量成正比。在酶標儀中以450nm處的分光光度法測量光密度(OD),從中可以計算FBN1的濃度。

 

試劑制備:

此過程僅供參考。產品手冊可能略有不同。產品應按照隨附的產品手冊上的規定使用,并與產品一起交付。

1)標準品:用推薦體積的標準稀釋緩沖液配制標準品,制成標準溶液。然后按照實驗方案中的說明,使用標準稀釋劑緩沖液對標準溶液進行連續稀釋。

2) 洗滌緩沖液:按照實驗方案中的說明,用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3)檢測試劑制備:計算所需工作液的總體積。稀釋檢測試劑 和檢測試劑 分別用稀釋劑 和稀釋劑 以 1100 的比例稀釋。

 

檢測程序:

此過程僅供參考。產品手冊可能略有不同。產品應按照隨附的產品手冊上的規定使用,并與產品一起交付。

1)制定標準,測試樣品和控制井。

2) 將 100 μl 稀釋的標準品分裝到標準孔中。

3) 將 100 μl 標準稀釋緩沖液分裝到對照(零)孔中。

4) 將 100 μl 稀釋的樣品分裝到樣品孔中。在37°C孵育1小時。

5) 將 100 μl 檢測試劑 分裝到每個孔中。在37°C孵育1小時。

6)洗滌3次。

7) 將 100 μl 檢測試劑 分裝到每個孔中。在37°C孵育30分鐘。

8)洗滌5次。

9) 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中。在37°C孵育10-20分鐘。

10) 分裝 50 μl 終止液。

11) 在 450 nm 處測量外徑。

 

協議:

此過程僅供參考。產品手冊可能略有不同。產品應按照隨附的產品手冊上的規定使用,并與產品一起交付。

使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫(18 - 25°C)。建議為每個測試繪制一條標準曲線。

1.在預涂板上分別設置標準、測試樣品和對照(零)孔,然后記錄它們的位置。建議至少測量每個標準品和樣品一式兩份。

2. 將 100 μL 每種標準品、對照品和樣品加入適當的孔中。用蓋子密封板,在 37°C 下孵育 小時。

3. 取下蓋子,丟棄液體。

4. 向每個孔中加入 100 μl 檢測試劑 工作溶液。用蓋子密封板,在 37°C 下孵育 小時。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 次。

6. 向每個孔中加入 100 μL 檢測試劑 工作液,密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液,按照上一步所述用洗滌緩沖液洗滌板 次。

8. 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中。用蓋子密封板,在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時間僅供參考,最佳時間應由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

9. 向每個孔中加入 50 μL 終止液。立即以 450 nm 讀取。

 

結果計算:

計算時,對每個參考標準和每個樣品的 O.D.450 重復讀數求平均值,然后減去平均對照(零)O.D.450 讀數。標準曲線可以繪制為每種參比標準溶液[Y]的相對外徑450與每種標準溶液(X)的相應濃度的關系。樣品的Asprosin濃度可以從標準曲線中插值。

 

檢測精密度:

測定內精密度(測定內精密度):在一個平板上分別測試3個低、中、高水平Asprosin樣品20次。

批間精密度(測定間精密度):在 3 個不同的平板上測試 個含有低、中、高水平 Asprosin 的樣品,每個平板重復 次。

CV %) =(標準偏差/平均值) × 100 批內:CV<10%批間:CV<12%

 

僅供研究使用。 范圍和靈敏度可能會發生變化。

 

作為在中國的區域Abbexa代理,艾美捷將為中國客戶提供全面的Abbexa產品以及客戶訂制化服務。


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