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用于 3D 凝膠的 RatCol 是 25 mL 的 4 mg/ml I 型鼠尾端膠原溶液,用于 2D 涂層或 3D 水凝膠。該 3D 凝膠套件配有中和溶液,易于操作。作為端膠原蛋白,用于 3D 凝膠的 RatCol 將形成比端膠原蛋白更堅固的水凝膠。 RatCol I 型酸溶性鼠尾膠原蛋白在 0.02M 乙酸溶液(~pH 3)中含有 100 mg,濃度約為 4 mg/mL。 RatCol 膠原蛋白是可溶性端膠原蛋白。每個產品包括一瓶含有 100 毫克膠原蛋白溶液的瓶子,以及一瓶用于形成膠原蛋白凝膠的預先配制的中和溶液。該產品經過無菌過濾。
艾美捷鼠尾膠原蛋白溶液,I 型,4 mg/ml,25 mL(3D 水凝膠)+ 中和溶液(ABM-5153-1KIT)非常適合表面涂層、為培養細胞提供薄層的制備或用作固體凝膠。 RatCol 膠原蛋白適用于使用多種細胞系的應用,包括肝細胞、成纖維細胞和上皮細胞。
鼠尾膠原蛋白溶液,I 型,4 mg/ml,25 mL(3D 水凝膠)+ 中和溶液存儲/穩定性:
存放在2-10°C,并在冷凍膠冰包中運輸。不要冷凍。每個特定批次的產品標簽和分析證書上列有過期日期。當產品按照指示處理和存儲時,過期日期有效。注意事項和免責聲明:本產品僅供研發使用,不適用于人類或其他用途。請查閱材料安全數據表,了解有關危險和安全操作規范的信息。
涂層程序注意:采用無菌操作規范,以保持產品在膠原蛋白和其他溶液的準備和處理過程中的無菌性。
1. 將所需量的膠原溶液從瓶中轉移到稀釋容器(如有必要)。使用無菌0.1%醋酸溶液進一步稀釋至所需濃度。典型的工作濃度可能在50至100μg/ml范圍內。注意:將這些建議作為指導,以確定您培養系統的最佳涂層條件。
2. 向培養表面添加適量稀釋的鼠尾膠原。
3. 在室溫下蓋好孵育1-2小時。吸去任何剩余物質。或者,孵育至表面變干。
4. 孵育后,吸去任何剩余物質。
5. 小心用無菌培養基或PBS沖洗涂層表面,避免刮傷表面。
6. 涂層表面已準備好使用。如果保持無菌性,也可在2-8°C潮濕或晾干存放。
使用提供的中和溶液進行3D凝膠制備程序注意:采用無菌操作規范,以保持產品在膠原蛋白和其他溶液的準備和處理過程中的無菌性。建議在準備膠原蛋白期間將膠原蛋白和其他工作溶液冷藏并放在冰上。
1. 確定所需的膠原體積。
2. 將冷卻的中和溶液的1部分轉移至無菌混合容器或試管中。
3. 將鼠尾膠原的9部分轉移到無菌混合容器或試管中,總共為10部分。
4. 輕輕攪拌混合物或上下移液以混合。不建議使用渦流器。
5. 將鼠尾膠原混合物分配到所需的培養皿或培養器皿中。6. 在37°C孵育1小時以形成凝膠。
鼠尾膠原蛋白溶液,I型部分文獻參考:
1. Tanzer, M. L., Cross-linking of collagen. Science, 180(86), 561-566 (1973).
2. Bornstein, P., and Sage, H., Structurally distinct collagen types. Ann. Rev. Biochem., 49, 957-1003 (1980).
3. Tomasek, J.J., and Hay, E.D., Analysis of the role of microfilaments in acquisition and bipolarity and elongation of fibroblasts in hydrated collagen gels. J. Cell Biol., 99, 536-549 (1984).
4. Roeder, B.A., et al., Tensile mechanical properties of three-dimensional type I collagen extracellular matrices with varied microstructure. J. Biomech. Eng., 124, 214-222 (2002).
5. Sato, M., et al., 3-D Structure of extracellular matrix regulates gene expression in cultured hepatic stellate cells to induce process elongation. Comp Hepatol., Jan 14;3 Suppl 1:S4 (2004).
6. Li, G.N., et al., Genomic and morphological changes in neuroblastoma cells in response to three-dimensional matrices. Tissue Eng., 13, 1035-1047 (2007).
7. Karamichos, D., et al., Regulation of corneal fibroblast morphology and collagen reorganization by extracellular matrix mechanical properties. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 48, 5030-5037 (2007).
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