鐵（分子量55.845克/摩爾）是一種在所有已知生物體的各種代謝過程中都不可少的元素。其中最重要的過程包括電子傳遞、氧氣運輸和DNA合成。鐵最常見的存在形式是鐵-硫中心和各種血紅素。與其他大多數通過吸收和排泄來調節水平的離子不同，體內的鐵水平僅通過吸收過程來控制。AkrivisBio的鐵檢測試劑盒是一種簡單直接的方法，用于測定樣本中的亞鐵離子（Fe2?）。在檢測中，樣本中存在的鐵化合物可以選擇性地被還原為亞鐵形式（Fe2?），然后與FereneS反應生成一個在593納米處具有最大吸收峰的穩定色素。通過添加一種添加劑來防止銅的干擾。該檢測適用于多種樣本中鐵含量在0到10納摩爾范圍內的測定。

艾美捷鐵測定試劑盒：

貨號：MA-0103

規格：100孔

樣本類型：細胞或組織裂解液、血清

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測方法：比色法，檢測波長593納米

檢測類型：定量

應用：基于微孔板的比色法檢測，用于測量樣本中鐵含量（0-10納摩爾）。

檢測范圍：0-10納摩爾

儲存條件：+4°C

運輸條件：凝膠冷藏包

鐵測定試劑盒檢測組分：

-檢測緩沖液：25毫升，貨號WMMA-0103A

-鐵還原劑：0.7毫升，綠色，貨號MA-0103B

-FereneS：12毫升，貨號NMMA-0103C

-Fe3?標準品（100mM）：0.1毫升，黃色，貨號MA-0103D

鐵測定試劑盒檢測原理：

1.鐵化合物被溶解，使所有Fe2?和Fe3?都可用。Cu2?被螯合以去除干擾。

2.可選擇性地添加還原劑將Fe3?轉化為Fe2?（總鐵）或省略（僅還原鐵，Fe2?）。

3.添加FereneS形成色素。

儲存和處理：

將試劑盒儲存于4°C。使用前將所有組分恢復至室溫。混合鐵還原劑以溶解在冷凍過程中可能形成的任何沉淀。打開試劑瓶前請短暫離心。

檢測步驟：

1.鐵標準曲線：將10微升100mM的鐵標準品用990微升去離子水稀釋，生成1mM的鐵標準品。將稀釋后的鐵標準品0、2、4、6、8和10微升分別加入96孔板中，生成每孔0、2、4、6、8和10納摩爾的鐵標準品。向每個標準品孔中加入5微升鐵還原劑，并用鐵檢測緩沖液將所有標準品孔的體積調整至100微升。

2.樣本測試：

-a.可以直接測試液體樣本（如血清）中的亞鐵（Fe2?）、總鐵（Fe2?+Fe3?）或鐵（Fe3?）。每孔最多可加入50微升血清。正常血清中鐵水平約為10-40微摩爾。軟組織或細胞可以用5-10倍體積的鐵檢測緩沖液（例如，每100毫克濕組織或約5×10?細胞用500微升鐵檢測緩沖液）進行勻漿。用探針超聲儀或Dounce玻璃珠勻漿器充分勻漿組織樣本，然后以16,000×g離心10分鐘，將上清液轉移至新的微量離心管中。所有最終讀數應在標準曲線范圍內。如果任何樣本超出該范圍，應適當稀釋并重新運行。

-b.僅檢測亞鐵（Fe2?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中，并用鐵檢測緩沖液將體積調整至每孔100微升。檢測總鐵（Fe2?+Fe3?）：將1-50微升樣本加入96孔板的樣本孔中。向每個樣本中加入5微升鐵還原劑，將Fe3?還原為Fe2?。用鐵檢測緩沖液將體積調整至每孔100微升。

-c.在37°C下，讓Fe3?w全還原為Fe2?，持續30分鐘。

-d.向含有鐵標準品和測試樣本的每個孔中加入100微升鐵探針。充分混合。在37°C下，避光讓顏色w全顯色，持續60分鐘。

3.測量：在微孔板讀數器上監測593納米處的吸光度。

4.典型結果：

5.計算：從所有其他標準品和樣本讀數中減去零標準品的讀數。繪制標準曲線。確定標準曲線的斜率。將背景校正后的樣本讀數除以標準曲線的斜率，以獲得每孔中的鐵納摩爾數。測試樣本中的Fe2?和總鐵（Fe2?+Fe3?）直接從標準曲線確定。測試樣本中的Fe3?含量通過從總鐵（Fe2?+Fe3?）中減去Fe2?來計算。通過以下方法確定原始樣本中的Fe2?、Fe3?或總鐵（Fe2?+Fe3?）濃度：

-A.將每孔的納摩爾數除以加入孔中的樣本體積（微升）=每微升樣本中的鐵納摩爾數

-B.將每微升樣本中的鐵納摩爾數乘以上述2a中上清液的總體積=每樣本中的總鐵納摩爾數

-C.將每樣本中的總鐵納摩爾數除以用于制備樣本的組織毫克數或細胞數量=每毫克組織（或每細胞數量等）中的鐵納摩爾數