犬補體因子3（C3）檢測試劑盒是一種高度敏感的雙位點酶聯(lián)用于測定狗血漿和血清樣本中C3的免疫測定法（ELISA）。For僅供研究使用。不用于診斷程序

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO銷售產(chǎn)品補體因子3(犬)ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

補體因子3(犬)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測定中，樣品中的C3與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗C3抗體發(fā)生反應。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗C3抗體。這些酶標記的抗體與之前結(jié)合的C3形成復合物。經(jīng)過再次洗滌后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測試樣品中C3的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中C3濃度的量度。測試樣品中C3的量可以從標準曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進行校正。

需要的材料但未提供：

? 精密移液器（2 ?L至200 ?L），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 微孔板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器（420 nm）

? 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

? 樣品收集用的離心機

? 血漿收集用的抗凝劑

? 計時器

試劑準備：

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

1. 稀釋液濃縮物

提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，4份dH2O）按1:5稀釋。

2. 洗滌液濃縮物

提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，19份dH2O）按1:20稀釋。濃縮物在低溫儲存時出現(xiàn)結(jié)晶并不罕見。稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C可以溶解結(jié)晶。

3. 酶標記檢測抗體

計算每個微孔板測試條所需的工作濃縮液量，通過向每個測試條使用的1X稀釋液中添加10 ?L酶標記檢測抗體和990 ?L。使用前立即稀釋，并避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

4. 抗犬C3 ELISA微孔板

按提供的狀態(tài)使用。打開微孔板袋，從袋中取出板。取出在測定中不會使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時放回干燥劑。

5. 犬C3校準物

根據(jù)批次特定的分析證書進行準備。

樣本收集和處理：

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險。處理和處置時遵循通用預防措施。

如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴重溶血、脂血或樣品完整性受到質(zhì)疑，請記錄并謹慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣品收集和儲存條件僅供參考。樣品穩(wěn)定性尚未評估。

血清樣品 - 應通過靜脈穿刺收集血液。血凝后通過離心分離血清。取出血清立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

血漿樣品 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行測定或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融。

已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

結(jié)果計算：

1. 從所有孔的測試值（吸光度讀數(shù)）中減去平均背景值（標準0的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對每個標準的平均重復讀數(shù)進行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標準曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計算機軟件來減少數(shù)據(jù)來構(gòu)建標準曲線。也可以使用二次多項式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數(shù)據(jù)的擬合精度會較低。

3. 從標準曲線中插值得到測試樣品值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣品中的C3濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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