腺相關病毒（AAV）源自有缺陷的細小病毒，它們依賴其他病毒（如腺病毒和皰疹病毒）提供的必需輔助功能，以實現(xiàn)高效的病毒復制和傳播。AAV與任何已知疾病沒病因學關聯(lián)，并且已成功用于在多種組織中建立高效且長期的基因表達，而不會引起顯著的細胞免疫反應或毒性。

AAV具有單鏈DNA基因組，長度約為4.7 kb。所有已鑒定的AAV血清型都具有三個關鍵特征，包括兩個AAV末端重復序列（ITR）、一個rep區(qū)和一個cap區(qū)。ITR能夠形成T形二級結構，是AAV復制、包裝、整合和拯救所需的唯1順式元件。rep區(qū)編碼四種重疊蛋白，分別命名為Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，這是根據(jù)蛋白的表觀分子質量來命名的。除了在AAV復制中的明確作用外，Rep蛋白還調節(jié)AAV的包裝和特異性整合。cap區(qū)編碼三種結構蛋白：VP1、VP2和VP3。這三種蛋白共享相同的閱讀框。

Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)允許在不使用輔助病毒的情況下生產(chǎn)具有感染性的重組人腺相關病毒（rAAV）顆粒（見圖2）。在AAV無輔助病毒系統(tǒng)中，生產(chǎn)感染性AAV顆粒所需的大多數(shù)腺病毒基因產(chǎn)物由共轉染到細胞中的質粒pHelper提供（即E2A、E4和VA RNA基因）。其余的腺病毒基因產(chǎn)物由293宿主細胞提供，這些細胞穩(wěn)定表達腺病毒E1基因。通過消除對活輔助病毒的需求，AAV無輔助病毒系統(tǒng)提供了一個更安全、更便捷的基因傳遞系統(tǒng)。在AAV無輔助病毒系統(tǒng)中，rep和cap基因已從含有AAV-2 ITR的病毒載體中移除，并在質粒pAAV-RC上以反式提供。移除AAV的rep和cap基因使得可以在病毒基因組中插入感興趣的基因。Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)可以容納長達3 kb的插入片段。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs銷售產(chǎn)品pAAV-KP1矢量。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

相關產(chǎn)品

1. VPK-400-DJ：AAV-DJ無輔助病毒包裝系統(tǒng)  

2. AAV-100：293AAV細胞系  

3. VPK-140：ViraBind? AAV純化試劑盒  

4. VPK-141：ViraBind? AAV純化超大試劑盒  

5. VPK-145：QuickTiter? AAV定量試劑盒  

6. AAV-200：ViraDuctin? AAV轉導試劑盒  

結果示例

以下圖表展示了使用Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)的典型結果。以下數(shù)據(jù)僅供參考。

圖5：AAV2-GFP的生產(chǎn)和轉導

通過共轉染293AAV細胞（貨號AAV-100）與pAAV-GFP（貨號AAV-400）、pAAV-RC2和pHelper來生產(chǎn)AAV2-GFP。293AD細胞（貨號AD-100）用AAV2-GFP病毒上清感染48小時。左上：轉染前的293AAV細胞（10倍）；右上：轉染后48小時的293AAV細胞（10倍）；左下：轉染后48小時293AAV細胞中的GFP表達（10倍）。右下：轉導后48小時293AD細胞中的GFP表達（20倍）。

文獻參考：

1. Auricchio, A., Hildinger, M., O'Connor, E., Gao, G. P. and Wilson, J. M. (2001) Hum Gene Ther 12:71–6.

2. Brument, N., Morenweiser, R., Blouin, V., Toublanc, E., Raimbaud, I. et al. (2002) Mol Ther 6:678–86.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C. and Nairn, R. (1977) J Gen Virol 36:59-74.

5. Grimm, D. and Kleinschmidt, J. A. (1999) Hum Gene Ther 10:2445-50.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產(chǎn)商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的g端產(chǎn)品和技術服務。產(chǎn)品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業(yè)的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產(chǎn)品。  

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