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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠大隱靜脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠大隱靜脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

細胞簡介：

大鼠大隱靜脈平滑肌細胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內側端，經內踝前方，沿小腿內側緣伴隱神經上行，經股骨內側髁后方，進入大腿內側部，與股內側皮神經伴行，逐漸向前上，在恥骨結節外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內側淺靜脈和股外側淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結扎時，須分別結扎、切斷各屬支，以防復發。大隱靜脈平滑肌細胞主要功能：①血管平滑肌細胞的生長潛力是原發血管病發的重要異常因素；②參與血管壁的炎癥反應，并與血管疾病的進展和穩定有關。因此，研究大隱靜脈平滑肌細胞的代謝和信號通路是研究大隱靜脈擴張等疾病的良好實驗材料。大隱靜脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態最佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產品：

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內脂素/內臟脂肪素(visfatin)試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表面活性蛋白D(SP-D)試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF試劑盒豚鼠肝細胞生長因子(HGF)試劑盒規格：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍蛋白(CP/CER)試劑盒規格：96T/48T

豚鼠催產素(OT)試劑盒 ，英文名： OT ELISA Kit

Human poly serum protein (PHSA) ELISA Kit 人多聚血清蛋白(PHSA)試劑盒

rabbitprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-LPH(HumanBeta-lipoopichormone)ELISAKit人β-促脂素

細菌細胞趨化作用(chemotaxis)軟瓊脂試劑盒10次

rabbitImmunoglobulinA,IgAELISAKit兔子免疫球蛋白A(IgA)試劑盒規格：96T/48T

人周期素依賴性激酶5試劑盒   人周期素依賴性激酶5試劑盒   規格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶5試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人周期素依賴性激酶5試劑盒、人周期素依賴性激酶5 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人周期素依賴性激酶4試劑盒   人周期素依賴性激酶4試劑盒   規格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶4試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人周期素依賴性激酶4試劑盒、人周期素依賴性激酶4 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人周期素依賴性激酶2試劑盒   人周期素依賴性激酶2試劑盒   規格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶2試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人周期素依賴性激酶2試劑盒、人周期素依賴性激酶2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人周期素依賴性激酶1試劑盒   人周期素依賴性激酶1試劑盒   規格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人周期素依賴性激酶1試劑盒、人周期素依賴性激酶1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

SDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1 0.5mgSDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 標簽) Protein

AMBP Protein Human 重組人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (His 標簽)

IL1RAPL2 Protein Human 重組人 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白

A549/DDP細胞，耐DDP肺癌細胞 中國倉鼠肺細胞,CHL細胞 CM-M002小鼠肺血管平滑肌細胞SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細胞裂解液   U251細胞，膠質瘤細胞 鼠成纖維細胞系 豬原代膀胱上皮細胞 大鼠原代腦皮層神經元細胞

大鼠大隱靜脈平滑肌原代細胞RNA結合基元蛋白20(RBM20)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

PLK1重組小鼠 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

IL12A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標簽)

IZUMO1重組人 IZUMO1 蛋白 Protein