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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈血管內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

細胞簡介：

大鼠腦靜脈血管內皮細胞分離自腦靜脈組織；與腦動脈相比，腦靜脈管壁較薄。與身體其他部位的靜脈不同，腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴高位的勢能。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經腦深部靜脈和腦血竇流入頸內靜脈醫|學教育網搜集整理；小部腦靜脈血經眼部翼狀靜脈叢，進入靜脈導血管再到頭皮，最后流入椎管中的椎旁靜脈系統。腦靜脈系統有大量交通枝靜脈叢，即使兩側頸內靜脈都被阻塞，大腦靜脈血仍可經椎靜脈和頸外靜脈系統完成其回流。腦靜脈血管內皮細胞的主要功能是維持血管內外的動態平衡，合成和分泌細胞因子和介質參與免疫反應，維持凝血和纖溶的動態平衡。

培養信息：

?包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產品：

兔血管生成素2(ANG-2)ELISA 試劑盒

Oxidized low density lipoprotein aibody against rat (OLAb) ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)試劑盒

HumanLeishimariaaibodyELISAKit 人利什曼原蟲抗體(LeishimariaAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanFreeTestoterone,F-TESTO試劑盒人游離睪同(F-TESTO)試劑盒規格：96T/48T

組織半胱蛋白酶-3(CASPASE-3)活性熒光定量試劑盒20次

HumanNeural-Cadherin,N-CadELISAKit人N鈣黏蛋白/神經鈣黏蛋白(N-Cad)試劑盒規格：96T/48T

豬促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒

Human macrophage inflammatory protein 1 beta (MIP-1 beta /CCL4) ELISA Kit 人巨噬細胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)試劑盒

PorcineEsogen,EELISAKit 豬雌激素(E)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlphaManase(MouseAlphamannosidase)ELISAKit小鼠α甘露糖苷酶

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續循環光譜法定量試劑盒20次

Mouseα-L-iduronidase,IDUAELISAKit小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)試劑盒

兔子端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA. 

兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISAKit   ELISA. 

兔子促上腺皮質激素(ACTH)ELISAKit   ELISA.

CHEK1重組小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重組蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

BCL2L12重組人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 標簽) Protein

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標簽)

CL-0238U-87 MG(人神經膠質瘤細胞)  孔雀綠0酸鹽檢測試劑盒MGmP  小鼠成纖維細胞(EGFP標記) 人肺癌細胞，SW 900[SW-900; SW900]細胞 P3X63Ag8(骨髓瘤細胞)  肝內膽管上皮細胞Many   Hep-2   人喉表皮癌細胞 小鼠原代小腸隱窩上皮細胞 小鼠原代腎臟巨噬細胞

大鼠腦靜脈血管內皮原代細胞MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

IL1R2 Protein Human 重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

TNFSF12重組食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MERTK Protein Mouse 重組小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 標簽)

TPH1重組人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein