大鼠食管成纖維原代細胞

大鼠食管成纖維細胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統發生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連，腹段很短與胃相連。在發育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變為復層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。食管的外膜，由疏松結締組織構成，富有血管、淋巴管及神經。主要包含食管成纖維細胞，成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

產品名稱：大鼠食管成纖維細胞

組織來源：食管

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠食管成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的優良培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的大鼠食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠食管成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

大鼠轉化生長因子β3(TGFβ3)試劑盒 ，英文名： TGFβ3 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 小鼠角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白

微粒體S轉移酶(GSHST)活性比色法定量試劑盒20次

大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit，大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit，

抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白 Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, Fc 標簽)

CA9重組人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白  Protein

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)

IL17A重組人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

兔血管生成素2試劑盒   兔血管生成素2試劑盒   規格型號：96T/48T   兔血管生成素2試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔血管生成素2試劑盒、兔血管生成素2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔血管內皮細胞粘附分子1試劑盒   兔血管內皮細胞粘附分子1試劑盒   規格型號：96T/48T   兔血管內皮細胞粘附分子1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔血管內皮細胞粘附分子1試劑盒、兔血管內皮細胞粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔血管內皮細胞生長因子試劑盒   兔血管內皮細胞生長因子試劑盒   規格型號：96T/48T   兔血管內皮細胞生長因子試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔血管內皮細胞生長因子試劑盒、兔血管內皮細胞生長因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   規格型號：96T/48T   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔血管緊張素Ⅱ試劑盒、兔血管緊張素Ⅱ 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

CD80重組小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 蛋白 Protein

CD8a分子(CD8a)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 8a (CD8a)

ORM2重組人 ORM2 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

MMP9 Protein Rat 重組大鼠 MMP-9 / CLG4B 蛋白

CSSTL1 中華鱉肺來源細胞  小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL  IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   MET Others Rat 小鼠原代前列腺成纖維細胞 兔原代胸主動脈平滑肌細胞

大鼠食管成纖維原代細胞乙酰羧化酶α(ACACα)重組蛋白 Recombinant Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標簽)

MCAM重組人 CD146 / MCAM 蛋白 Protein

GST Protein Schistosoma japonicum 重組日本血吸蟲 Glutathione S-transferase / GST 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。