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詳細(xì)介紹
兔肝非實(shí)質(zhì)原代細(xì)胞
兔肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞是指除了肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞之外的細(xì)胞，主要包含了肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、肝枯否細(xì)胞。
英文名稱 | Rabbit Hepatic Nonparenchymal Cells | 組織來源 | 肝 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8350 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞
組織來源：肝
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不增殖；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝非實(shí)質(zhì)采用取肝臟灌流、膠原酶消化、密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝非實(shí)質(zhì)經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
7WML6.0細(xì)胞，人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株 生孢梭菌 狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL1 | Rhesus antibody Rh GDIA1 轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體 規(guī)格 0.1ml |
SP-A(Human Pulmonary surfatcant-associated protein A) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/PE PE標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml |
IL-8： 白介素8抗體 0.1ml | ANNA-1/Hu(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit 人抗元核抗體1型/抗Hu抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RERE 肌相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-LDL-R/FITC 熒光素標(biāo)記低密度脂蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin(Ser38) 0酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml | MUC5AC(Mouse Mucin-5 subtype AC) ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素5AC 96T |
PPBP Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | EJ 人膀胱癌細(xì)胞 |
SW1116人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
人胚腎細(xì)胞(亞系克隆);FIP293 | 人胚胎，皮膚，肌肉;M-22 |
人食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人食道平滑肌細(xì)胞裂解物HESMCL |
豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4 中國倉鼠體細(xì)胞，R 1610細(xì)胞 IAR20細(xì)胞，大鼠肝細(xì)胞 | 兔肝非實(shí)質(zhì)原代細(xì)胞ANNA-1/Hu(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit 人抗元核抗體1型/抗Hu抗體 96T |
人肺動脈成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-H095人骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
IFNA4 Protein Human 重組人 IFNα4 / IFNa4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | Rhesus antibody Rh APC6/CDC16 細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-BCAR1(Tyr165)： 0酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 0.1ml | 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7 |
Anti-Slug/FITC 熒光素標(biāo)記鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PBOV1： 前列腺癌和癌高表達(dá)蛋白抗體 0.2ml |
Anti-CDK3 /FITC 熒光素標(biāo)記周期素依賴性激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PPBP Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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