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熒光-PCR法原理:

所謂實(shí)時(shí)熒光-PCR法技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

熒光-PCR法技術(shù)步驟:

將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復(fù)性，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得Ct值，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。

熒光-PCR法服務(wù)流程:

1.客戶(hù)認(rèn)真寫(xiě)好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息;

2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款(30-50%);

3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶(hù)提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);

4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;

5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn)，主要檢測(cè)引物的特異性和擴(kuò)增效率;

6.正式定量實(shí)驗(yàn):對(duì)所有樣品上機(jī)檢測(cè);

7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報(bào)告。