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支原體污染的檢測及鑒定方法
閱讀：712 發(fā)布時(shí)間：2022-4-13支原體污染的檢測及鑒定方法：
1、分離培養(yǎng)法
支原體的病原學(xué)檢測主要是從被污染的細(xì)胞、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來確定，分離培養(yǎng)法是檢測支原體污染中最為可靠準(zhǔn)確的方法。但是支原體對環(huán)境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養(yǎng)操作相對繁瑣，所需時(shí)間較長，因此只能夠?qū)χгw污染進(jìn)行定性觀察。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法。
2、DNA熒光染色法
DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測周期，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結(jié)合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理，被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后，其細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光點(diǎn)，即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。
3、PCR技術(shù)
PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡便的基因診斷技術(shù)已應(yīng)用于科學(xué)研究和疾病的診斷。根據(jù)支原體基因組內(nèi)的保守序列設(shè)計(jì)特異引物，對待檢樣品的核酸進(jìn)行擴(kuò)增，通過對擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術(shù)用于支原體污染的檢測，周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單且一次可檢測大量樣品。
4、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）
ELISA用于支原體污染的檢測中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測。如今已有LONZA等公司開發(fā)了針對細(xì)胞中污染支原體的檢測試劑盒，具有簡便、快速與定量定性檢測等特點(diǎn)。
5、電鏡
一般在細(xì)胞培養(yǎng)48～72小時(shí)，細(xì)胞接近匯合前，用胰酶消化細(xì)胞制成細(xì)胞懸液后進(jìn)行固定、包埋、切片后才能進(jìn)行觀察。
6、定期檢測
支原體感染會使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規(guī)化堅(jiān)持下去，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對支原體感染的關(guān)鍵。