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Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒

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更新時間:2022-04-19 16:41:41瀏覽次數:263

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 50次
貨號 FS-X9556 應用領域 化工
主要用途 公司產品僅用于科研    
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒正在出售的產品:DU 145, 人前列腺癌細胞 Human

Hep-2, 人喉癌細胞系 Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌細胞 Human

HL-60, 人早幼粒白血病細胞 Human

詳細介紹

中文名稱:Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱:Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

產品規格:50次

發貨周期:1~3天

本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。

細胞凋亡早期改變發生在細胞膜表面,這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外,使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂,正常主要存在于細胞膜的內面,在細胞發生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的,也可發生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)不能通過完整的活細胞,但能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色, 因此通常將Annexin V與PI配合染色, 以區別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。

操作步驟:

1、細胞樣品的準備:

a.對于貼壁細胞:小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

b.對于懸浮細胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

2、用去離子水按 1:3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。

3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞,調節其濃度為 1×106/ml。

4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。

5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

6、在反應管中加 400μl PBS,流式細胞儀(FACS)分析。

儲存條件:2~8℃,避光保存
注意事項:

1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養基,并用新鮮培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

操作規程:

1、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)

抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)elisa試劑盒英文名稱:PCNA ELISA Kit肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體包裝5ml

抗胰蛋白酶(AT)elisa試劑盒英文名稱:AT ELISA Kit蛋白激酶A2抗體包裝1g

抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)elisa試劑盒英文名稱:PA-IgG/M/A ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體2抗體包裝5g

抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa試劑盒英文名稱:ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗體包裝100g

抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)elisa試劑盒英文名稱:ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基酶樣蛋白2抗體包裝25g

抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)elisa試劑盒英文名稱:ACA-IgA ELISA Kit血管內皮遷移蛋白抗體包裝5g

抗心肌抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱:AMA ELISA Kit糖還原酶相關蛋白質抗體包裝100g

抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)elisa試劑盒英文名稱:snRNP/Sm ELISA Kit膽汁酸結合蛋白DDH2抗體包裝25g

抗線粒體抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱:AMA ELISA Kit血管生成素樣蛋白3抗體包裝500g

抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)elisa試劑盒英文名稱:aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激酶線粒體抗體包裝50MG

抗透明帶抗體(aZP)elisa試劑盒英文名稱:aZP ELISA Kit磷酸化內收蛋白a1抗體包裝25ml

抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)elisa試劑盒英文名稱:dsDNA ELISA Kit自噬體ATG16L2蛋白抗體包裝1g

抗平滑肌抗體(ASMA)elisa試劑盒英文名稱:ASMA ELISA Kit酸性磷酸酶抗體包裝100g

抗凝血酶受體(ATR)elisa試劑盒英文名稱:ATR ELISA Kit酸性磷酸酶抗體包裝25g

抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)elisa試劑盒英文名稱:AT-Ⅲ ELISA Kit光激酶A相互作用蛋白1抗體包裝25g

粘附相關激酶抗體B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高選擇性的 CDK4/6 抑制劑,IC50 分別為11 nM 和 16 nM。
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒支鏈淀粉

其他膠淀粉;淀粉精

英文名稱:Amylopectin from potato starch

產品規格:BR,土豆來源

包裝:1克/5克/50克

產品規格:BR,玉米來源

包裝:25克/100克/500克

CAS號:9037-22-3

級別:BR

比旋光度:165~185°(C=0.2 in 0.85% Sodium Chloride at 25℃)

性狀:至淡黃色粉末。為組成天然淀粉的兩種主要高分子碳水化合物(直鏈淀粉和支鏈淀粉)之一。作為一種葡萄糖的聚合物系由α-14糖苷鍵將葡萄糖單元聯結而成的鏈狀物質。它的分子通常卷曲成螺旋形。每一轉有六個葡萄糖分子。聚合度,即葡萄糖單位數目約在100~6 000,形成不同大小的分子,其分子量即為聚合度和葡萄糖單位分子量162的乘積。直鏈淀粉構成天然淀粉的顆粒,以其不同于支鏈淀粉的性質影響天然淀粉的性質及相關的應用。如直鏈淀粉可與醇、脂肪酸結合成復合物而沉淀。在堿性溶液中易發生降解反應。又因分子聚縮而有“凝沉"(retrogradation),即工業上稱為“回生"、“老化"的傾向。其直鏈可被β-淀粉酶*消化。淀粉與碘反應形成藍色絡合物。它存在于大多數源于糧谷類、薯類等農作物的天然淀粉中,一般為淀粉的17%~27%

用途:生化研究。

保存:RT

 


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