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大鼠骨髓肥大細胞

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    上海市

規格
5×1055750元15 瓶 可售
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更新時間:2025-04-09 10:53:01瀏覽次數:439

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×105cells/T25細胞培養瓶
貨號 A01X1692 主要用途 僅供科研實驗
組織來源 骨髓組織 種屬來源 大鼠
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詳細介紹

大鼠骨髓肥大細胞

培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

傳代特性:不建議傳代

消化液:0.25%胰dan白酶

培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%

細胞簡介:肥大細胞(Mast cell, MC)是和血液的嗜堿粒細胞一樣,具有強嗜堿粒顆粒的組織細胞,細胞核小,位于細胞中央。MC分泌多種細胞因子,參與免疫調節。此外,還表達MHC分子,B7分子。有研究表明,MC在超敏反應如支氣管哮喘的致病方面起著重要作用,在自身免疫疾病如多發性硬化、類風濕關節炎中起作用。
一、細胞基本屬性

細胞名稱

大鼠骨髓肥大細胞

商品貨號

A01X1692

組織來源

骨髓組織

種屬來源

大鼠

產品規格

5×105cells/T25細胞培養瓶

生長特性

懸浮

換液頻率

2-3天換液一次

細胞形態

圓形、卵圓形


原代細胞分離培養的思路:

取材--分離--培養--鑒定

首先將組織從機體中取出,經胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,再在合適的培養基中培養,使細胞繁殖到一定系數后進行細胞鑒定。

6.jpg

實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻,鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中,置于37℃、5%CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含素的混合培養基,隨后隔天換液。

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注意事項:

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中,yi酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和技術部溝通;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。


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