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大鼠肝成纖維細胞

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5×1053750元15 瓶 可售
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更新時間:2025-04-09 10:53:01瀏覽次數(shù):437

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
貨號 A01X1575 主要用途 僅供科研實驗
組織來源 肝組織 種屬來源 大鼠
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詳細介紹

大鼠肝成纖維細胞

培養(yǎng)基:原代成纖維細胞培養(yǎng)體系

傳代特性:根據(jù)細胞特性

消化液:0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件:氣相:空氣 95%;  CO2 ,  5%

細胞簡介:肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官 ,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用。肝臟是尿素合成的主要器官 ,又是新陳代謝的重 要器官。肝臟對來自體內和體外的許多非營養(yǎng)性物質如各種藥物、毒物以及體內 某些代謝產物 ,具有生物轉化作用。通過新陳代謝將它們分解或以原形排出 體外。在肝中及外圍有部分結締組織 ,這些結締組織是由成纖維細胞組成。
一、細胞基本屬性

細胞名稱

大鼠肝成纖維細胞

商品貨號

A01X1575

組織來源

肝組織

種屬來源

大鼠

產品規(guī)格

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

生長特性

貼壁

換液頻率

2-3天換液一次

細胞形態(tài)

長梭狀


原代細胞分離培養(yǎng)的思路:

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機體中取出,經胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞,再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。

6.jpg

實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

2.png
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注意事項:

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中,yi酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術部溝通;由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。


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