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詳細介紹
大鼠肝成纖維細胞
培養基：原代成纖維細胞培養體系
傳代特性：根據細胞特性
消化液：0.25%胰dan白酶
培養條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
細胞簡介：肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用。肝臟是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重 要器官。肝臟對來自體內和體外的許多非營養性物質如各種藥物、毒物以及體內 某些代謝產物 ，具有生物轉化作用。通過新陳代謝將它們分解或以原形排出 體外。在肝中及外圍有部分結締組織 ，這些結締組織是由成纖維細胞組成。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 大鼠肝成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1575 |
組織來源 | 肝組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態 | 長梭狀 |
原代細胞分離培養的思路：
取材--分離--培養--鑒定
首先將組織從機體中取出，經胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養基中培養，使細胞繁殖到一定系數后進行細胞鑒定。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含素的混合培養基，隨后隔天換液。
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注意事項：
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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