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-20℃ 避光

1.避免反復(fù)凍融。
2.可以根據(jù)需要分裝后凍存。
3.探針為DMSO溶液，在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

6個(gè)月

1.熒光酶標(biāo)儀 2.熒光光度計(jì)

純化線粒體

1.使用方便：可用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；
2.背景低，靈敏度高；
3.線性范圍寬，使用方便。

1.熒光酶標(biāo)儀 2.熒光光度計(jì)， 2.離心機(jī) 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒

PBS緩沖液或者HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.黑色96孔板

1.O07染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。 2.使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。 3.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。 4.標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定條件。以下方法僅供參考。 5.染色后立即進(jìn)行分析。 6.熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)必須使用熒光檢測(cè)專用的黑色96孔板。

染色工作液配制： 根據(jù)樣本數(shù)量，用染料稀釋液將BBcellProbe® O07熒光染料10倍稀釋，再用PBS緩沖液或者其它等滲緩沖液20-40倍稀釋，配制成染色工作液。 O07探針標(biāo)記： 1.準(zhǔn)備新鮮待測(cè)線粒體。 【注】: ?一般為大約總蛋白量為10～100 μg的純化的線粒體。 2.將線粒體樣本用200 μl染色工作液重懸，充分混勻。 3.在37℃避光孵育20-60分鐘。 4.孵育結(jié)束后，離心收集線粒體。 5.用PBS清洗線粒體一次。離心收集線粒體。 6.用200 μl PBS重懸線粒體。充分混勻。 7.加入熒光檢測(cè)用黑色96孔板。 8.置于酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm、發(fā)射波長(zhǎng)526 nm檢測(cè)熒光強(qiáng)度。 【注】: ?此處以酶標(biāo)儀檢測(cè)為例。 ?根據(jù)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備情況，沒有酶標(biāo)儀的話根據(jù)所使用的熒光光度計(jì)所需上樣體積重懸線粒體檢測(cè)。 結(jié)果處理： 熒光強(qiáng)度強(qiáng)表示線粒體活性氧強(qiáng)度高。 【注】： ?熒光強(qiáng)度強(qiáng)則活性氧（ROS）含量高。 ?可以用實(shí)驗(yàn)中對(duì)照樣本的熒光強(qiáng)度值為基準(zhǔn)，待測(cè)組樣本的熒光強(qiáng)度值占對(duì)照樣本的百分比來(lái)比較活性氧（ROS）程度差異。