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在生物藥品分析中的應用～培養液的氨基酸監測～
閱讀：992 發布時間：2021-7-10生物藥品多為通過細胞培養生產的蛋白質類藥品。在蛋白質生產的培養工序中，對溶氧量、PH值、溫度等各種工藝參數的監測或 控制至關重要。另外培養液中的氨基酸是重要的營養源，因此該監測有助于掌握細胞狀態、研討培養條件、研究最佳培養液組成。 此次我們向您介紹使用L-8900全自動氨基酸分析儀，對在不同培養條件下的培養液中的各種氨基酸濃度進行監測的結果。能 夠進行多成分同步分析并具有的定量精度的氨基酸分析儀，以其高分離度而著稱，可為培養工序的研究開發及品質管理提供 有價值的信息。
■氨基酸監測的樣品和色譜條件
＜生理體液分析法色譜條件＞ 色譜柱 ： #2622PF 4.6 mm I.D. × 60 mm 保護柱 ： #2619F 4.0 mm I.D. × 5 mm 脫氨柱 ： #2650L 4.6 mm I.D. × 40 mm 流動相 ： PF Buffer Kit 流速 ： 0.35 mL/min 柱溫 ： 32 ～ 70 ℃ 反應液 ： Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI 反應液流速 ： 0.3 mL/min 反應溫度 ： 135 ℃ 檢測波長 ： VIS 570 nm、440 nm 進樣量 ： 20 μL
＜樣品＞ 細胞 ： CHO細胞 (CRL-9606) 培養槽 ： 1 L 通風 ： 僅液面通風(Air、O2、N2、CO2的混合氣體) 培養基 ： Ham’sF12 + 10 % FBS 在以下條件的培養過程中，定時采樣，進行了分析。
＜預處理＞ 培養液與濃度5%的三氯yi酸溶液以1 : 1混合 ↓ 離心分離 10,000 rpm、10 min ↓ 過濾 Pore Size 0.2 μm ↓ 分析用樣品
?標準樣品的測定中，此次介紹的氨基酸中，Thr、Gly、Ala的峰保留時間的重現性為RSD = 0.05 ～ 0.07 %，峰面積的重現性為 RSD = 0.15 ～ 0.19 %，得以確認茚三酮柱后衍生法的高度重現性。(均為 n=3)(產品規格如下。峰保留時間的重現性：0.5 % 以內(Ala)、0.3 % 以內(Arg)；峰面積的重現性：1.5 % 以內(Gly、 His))
?通過監測培養液中各種氨基酸的濃度，可獲知培養過程中各成分的盈缺，因此有助于探討最佳培養液組成。另外，基于培養條件 的不同，可見日立氨基酸含量的變化出現差異的成分。可以認為這反映出細胞內的處理過程已發生變化，產生的蛋白質也可能不同， 因此培養液中氨基酸的同步監測可作為抗體藥物生產領域中生產管理的有效指標之一。