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賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司

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CRD系列無血清細(xì)胞凍存液使用常見問題匯總

2025-3-7  閱讀(207)

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        1、常規(guī)的細(xì)胞凍存主要采用DMSO+血清的方式,賽爾瑞成進(jìn)行凍存液的無血清、低(無)DMSO、無蛋白這些方向持續(xù)開發(fā)的原因是什么?


        細(xì)胞凍存液的研發(fā)歷史可以追溯到20世紀(jì)中期,隨著細(xì)胞生物學(xué)和低溫生物學(xué)的發(fā)展,凍存液逐漸優(yōu)化和改進(jìn)。20世紀(jì)60年代,DMSO成為常用冷凍保護(hù)劑,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凍存。隨后,凍存液中開始添加胎牛血清(FBS)等成分,提供營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)。20世紀(jì)80年代,科學(xué)家優(yōu)化凍存液配方,調(diào)整DMSO和血清濃度,減少毒性并提高凍存效果。


        DMSO作為常用的冷凍保護(hù)劑,在較高濃度或長(zhǎng)時(shí)間暴露下會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,影響細(xì)胞活力和功能。因此降低其濃度或?qū)ふ姨娲肥潜匾摹?br/>血清因其成分復(fù)雜、存在批次差異、成分不明確、存在病原體污染風(fēng)險(xiǎn)等原因,應(yīng)用無血清凍存液已成為細(xì)胞凍存領(lǐng)域主流。


        蛋白在凍存液中的添加可能為后續(xù)實(shí)驗(yàn)和監(jiān)管引入不可控的變量,且高質(zhì)量蛋白成本高,往往會(huì)提高凍存液的成本。


        賽爾瑞成自2018年推出第一款經(jīng)典的無血清細(xì)胞凍存液以來,CRD系列無血清細(xì)胞凍存液因其過硬且穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,獲得了國(guó)內(nèi)數(shù)百家實(shí)驗(yàn)室和企業(yè)用戶的認(rèn)可,廣泛服務(wù)于國(guó)內(nèi)細(xì)胞生物學(xué)研究和應(yīng)用。

 

6種凍存液.png


        2、應(yīng)用CRD系列凍存液進(jìn)行細(xì)胞凍存前需要注意什么?


        由于各類動(dòng)物細(xì)胞株(系)通常都比較脆弱,對(duì)所處的環(huán)境要求較高,而細(xì)胞凍存是讓人工干預(yù),強(qiáng)行讓細(xì)胞處于一種缺營(yíng)養(yǎng)的“冬眠"狀態(tài),所以凍存之前的細(xì)胞狀態(tài)對(duì)凍存的效果非常關(guān)鍵,建議凍存之前,務(wù)必讓細(xì)胞處于良好的對(duì)數(shù)期狀態(tài),凍存之前細(xì)胞存活率應(yīng)接近或達(dá)到100%。對(duì)于貼壁細(xì)胞,凍存之前,胰酶消化要適度,吹散和重懸動(dòng)作要適當(dāng),以免損傷細(xì)胞狀態(tài)。過度消化或未輕柔吹打和重懸的細(xì)胞由于狀況較差,通常不宜再冷凍保存。觀察凍存前的細(xì)胞狀態(tài)應(yīng)該在消化重懸完成后進(jìn)行,以確認(rèn)凍存時(shí)的細(xì)胞狀態(tài)良好。


        3、應(yīng)用賽爾瑞成的CRD系列無血清細(xì)胞凍存液發(fā)現(xiàn)有的細(xì)胞凍存效果不好?有什么建議?


        CRD系列無血清細(xì)胞凍存液主要依據(jù)成分的差異進(jìn)行產(chǎn)品命名,均為通用型細(xì)胞凍存液,經(jīng)過廣泛測(cè)試驗(yàn)證,適用于絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物(包括人)原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系以及雜交瘤細(xì)胞的凍存等。
        因?yàn)榧?xì)胞來源各異、種類繁多,并且新的細(xì)胞株(系)不停的涌現(xiàn),甚至許多細(xì)胞都是經(jīng)過工程化改造的細(xì)胞系,我們無法對(duì)市場(chǎng)上所有細(xì)胞株(系)進(jìn)行全面驗(yàn)證。因此,對(duì)于某些較為珍貴的細(xì)胞,建議用戶先進(jìn)行短期(如一周以內(nèi))凍存效果預(yù)實(shí)驗(yàn),或者同時(shí)使用傳統(tǒng)含血清的常規(guī)凍存液進(jìn)行對(duì)比測(cè)試,確認(rèn)無誤后再進(jìn)行正式批量?jī)龃妗?/span>


        4、凍存液瓶底出現(xiàn)沉淀,是不是產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)問題?


        凍存液中沉淀的出現(xiàn)一般存在如下三種情況:


      (1)溶液配置、過濾分裝過程中,異物的帶入。賽爾瑞成的無血清細(xì)胞凍存液的生產(chǎn)過程均嚴(yán)格按照GMP體系進(jìn)行管理,尤其在產(chǎn)品質(zhì)檢和出庫前會(huì)進(jìn)行雙重質(zhì)檢,在外觀上能夠杜絕此類現(xiàn)象的發(fā)生。這種情況,在我們的產(chǎn)品中罕見發(fā)生。


      (2)溶液染菌。賽爾瑞成無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)過程中有一個(gè)非常重要的步驟是用0.22μm孔徑濾膜進(jìn)行除菌過濾,且整個(gè)操作過程是在百級(jí)的環(huán)境中進(jìn)行操作。此外,我們會(huì)對(duì)每批終產(chǎn)品出廠前進(jìn)行無菌檢測(cè),確保終產(chǎn)品沒有染菌。


        為避免客戶在使用凍存液時(shí),產(chǎn)生細(xì)菌污染,建議如下:
        ①在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作,同時(shí)使用無菌的移液器、吸頭和容器,操作前后用75%乙醇或消毒劑清潔雙手。
        ②根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,可以將大包裝凍存液分裝成小份進(jìn)行保存,減少反復(fù)開啟瓶蓋帶來的污染風(fēng)險(xiǎn);


      (3)鹽溶液析出
        為保證達(dá)到更優(yōu)的保護(hù)效果,CRD系列無血清細(xì)胞凍存液含有維持細(xì)胞狀態(tài)良好的復(fù)合鹽離子成分,因此,在低溫保存一段時(shí)間后,瓶底可能會(huì)出現(xiàn)少量飽和析出的固體鹽沉淀,經(jīng)嚴(yán)格測(cè)試,對(duì)細(xì)胞凍存保護(hù)效果無任何不利影響,此時(shí)只需取用上清,正常使用即可,或者離心去除沉淀或者用過濾器(0.22μm孔徑濾膜)過濾去除少許沉淀。一般飽和析出不會(huì)發(fā)生第二次。


        若您在使用賽爾瑞成CRD系列無血清細(xì)胞凍存液過程中遇到任何問題,歡迎隨時(shí)與我們聯(lián)系。


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